口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体竞争磁微粒CLIA检测方法.pdfVIP

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体竞争磁微粒CLIA检测方法 1 范围 本文件规定了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体竞争磁微粒CLIA检测方法的试剂、仪器设备及耗 材、操作步骤、结果判定。 本文件适用于定量检测猪、牛、羊等偶蹄动物血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18935 口蹄疫诊断技术 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CLIA: 化学发光免疫分析法（ChemiluminescenceImmunoassay） ELISA：酶联免疫吸附试验 （Enzyme Linked ImmunosorbentAssay） 5 试剂 5.1 25 浓缩洗液，按照附录A.1 配置。 × 5.2 磁微粒工作液（偶联口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 的磁性微粒）。 5.3 酶标抗体（碱性磷酸酶标记的3A 蛋白单克隆抗体）。 5.4 稀释液，按照附录A.2 配置。 5.5 口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体工作校准品：包括工作校准品1、工作校准品2、工作校准品3、 工作校准品4、工作校准品5、工作校准品6，抗体含量分别为0U、12.5U、50U、200U、800U、1600 U，按照附录B 制备。 1 5.6 口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体产品校准品：包括产品校准品 1、产品校准品2、产品校准品3， 抗体含量分别为0U、100U、800U，按照附录C.1 制备。 5.7 口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体质控品：质控品1≤30U，质控品2 抗体含量范围应为180U～ 300U，按照附录C.2 制备。 5.8 化学发光底物。 6 仪器设备及耗材 本方法应准备仪器设备及耗材如下： ——全自动化学发光免疫分析仪：磁微粒酶促化学发光检测设备； ——电子天平：最大称量：Max=220g；最小称量：Min=10mg；显示分度值：d=0.1mg； ——离心机：最高转速：16000rpm； ——可调单道移液器（100μL、1mL）； ——1.5mL尖底离心管； ——反应杯； ——试剂船。 7 技术原理 本方法使用磁微粒化学发光免疫分析法，采用竞争原理，将口蹄疫3ABC蛋白作为抗原偶联于3μm 羧基磁微粒上，并同时加入待检血清和酶标抗体，二者竞争性的与3ABC蛋白上的相应表位结合。最后 加入化学发光底物，读取发光值，通过检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体工作校准品建立校准曲线， 将待检样本检测结果代入校准曲线计算非结构蛋白3ABC的抗体含量，判定阴阳性结果。 8 实验前准备 8.1 样品采集及保存 样品采集按照NY/T 541进行。无菌注射器静脉采血，不少于2mL，用自然析出法分离血清后，置 于无菌血清管中，按照GB 19489 样品处理的生物安全措施、实验室 生物安全通用要求处理样本，若 在一周内检测，可置2 ℃~8 ℃条件下保存，若超过一周检测，应置于-20 ℃以下冷冻保存。 血清样本运输时应注意2 ℃~8 ℃冷藏。 8.2 样品处理 取8.1中的样品，8000r/min，离心2min，取上清放于1.5mL尖底离心管中，体积应大于300 μL，待 检；若样品中存在沉淀或絮状物等杂质，应离心去除杂质，轻微操作，避免出现泡沫。 8.3 溶液配制 洗涤液：将25×浓缩洗液用无离子水或蒸馏水1:25倍稀释，装入洗涤液桶。 无离子水或蒸馏水均应符合GB/T 6682的要求。 8.4 仪器准备 2 阅读全自动化学发光免疫分析仪说明书，放置反应杯，扫码放置底物、系统维护液，开始自检。 8.5 试剂准备 将偶联磁微粒工作液、酶标抗体、稀释液分别装入试剂船上对应试剂瓶中，将磁微粒吹打混匀、试 剂船瓶盖换为胶盖；将试剂船装入试剂仓中。 9 操作步骤 9.1 校准曲线