植物生物技术.docVIP

- . z. 绪论 植物生物技术的概述：指生物技术在植物上的应用，包括植物组织培养技术、人工种子、细胞工程、基因工程等多个生物技术，主要是指植物基因工程和与之相关的植物组织细胞培养技术、分子标记育种技术等。 生物技术的产生和开展：现代生物技术是以20世纪70年代DNA重组技术的建立为标志的。开展迅速 植物生物技术的展望：植物生物技术被普遍认为是未来人类解决资源短缺不可或缺的技术，也是争取农产品高附加值的重要技术手段。 What is Biotechnology什么是生物技术：应用该技术通过添加来自另一生物的基因来修饰生物的生物功能 第一章 组织培养实验室建立与操作技术 标准的组织培养实验室包括：洗涤室〔准备室〕、配置室、灭菌室、接种室、培养室、观察室等。 组织培养所用到的器具：镊子类、剪刀类、组培瓶、各类器皿、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、试管以及移液管架、酒精、玻璃棒、 培养基的配制：无机营养成分、有机营养成分、碳源、激素、琼脂、水。其中无机营养包括大量元素、微量元素。有机营养包括氨基酸和维生素。碳源有蔗糖、葡萄糖、果糖，以蔗糖为主。激素包括生长素和细胞冲动素 植物生长调节物质：生长素：吲哚乙酸、NAA、2,4-D；细胞分裂素：控制植物细胞分化〔比例高时——产生芽,比例低时——产生根〕、赤霉素、脱落酸 作用：促进细胞生长和细胞分裂； 诱导受伤组织外表细胞恢复分裂能力； 形成愈伤组织，促进生根； 与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。 根据培养物的培养过程，培养基分为：初代培养基：用来第一次接种外植体的培养基；继代培养基：用来接种继初代培养物的培养基。 根据其作用不同，培养基分为：诱导培养基；增殖培养基；生根培养基。 根本培养基：主要有MS、White、 N6、B5 、改进MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等。 完全培养基：根本培养基的根底上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。 培养基的配制：计量、移液、取琼脂蔗糖备用、融化、混合、调pH、分装、包扎、培养基的灭菌 灭菌工作的重要性：预防感染杂菌的需要；消除生物污染的需要；防腐与保存的需要 灭菌的方法：a、物理方法：干热、湿热、过滤〔0.25微米〕紫外灯、超声波等。 b、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等 。 干热灭菌：适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150℃ 、40min或120℃ 、120min，如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min。 湿热灭菌：适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min。注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖 过滤灭菌：培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中*些成分遇到高温分解〔如*些生长调节剂GA3、玉米素等〕，就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌 。灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，参加适量的激素，然后分装。 射线灭菌：主要是利用紫外灯进展照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20～30min。 火焰灼烧灭菌：用火焰灼烧到达灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。 消毒剂 消 毒 剂 使用浓度(%) 消毒时间(min.) 效 果 残液去除难易 乙醇 70-75 0.1-3 好 易 氯化汞 0.1～1 2～15 最好 最难 过氧化氢 10～12 5～15 较好 最易 抗菌素 4～50mgl-1 30～60 较好 较难 次氯酸钙/纳 9 ～ 10 5～30 好 易 无菌操作技术 实验器具和材料的准备 用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 关紫外灯、翻开风机，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。〔注：没有特别情况，尽量不要下工作台〕 外植体和外质体的灭菌： 取流水冲洗〔至少30min〕过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次，放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接种器械进展别离、切割或其他处理。 翻开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊子将培养材料置于培养基上，灼烧镊子放回，灼烧瓶口，盖上瓶塞。 用酒精擦洗工作台和手。进展下一轮操作。 无菌操作的考前须知 〔