TCITS 0012-2023 牛乳基婴幼儿配方乳粉及牛乳中A1和A2β-酪蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法.pdfVIP

ICS67.100.99 CCS X16 团 体 标 准 T/CITS 0012—2023 牛乳基婴幼儿配方乳粉及牛乳中A1和A2 β-酪蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法  Determination ofAlandA2 β-casein inbovineinfant formulaandmilk LC-MS/MSmethod 2023-07-06发布 2023-08-01 实施 中国检验检测学会发布 T/CITS 0012—2022 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国检验检测学会提出并归口。 本文件起草单位：雀巢食品安全研究院、中国海关科学技术研究中心、青岛海关技术中 心、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。 本文件主要起草人：鲍蕾、冯鑫、张鸿伟、吕佳、汪龙飞、张晓梅、王金花、韩深、古 淑青、梁成珠。 T/CITS 0012—2022 牛乳基婴幼儿配方乳粉及牛乳中A1和A2 β-酪蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本规程规定了牛乳基婴幼儿配方乳粉和牛乳中A1β-酪蛋白(Alβ-Casein)、A2β-酪蛋白 (A2-βCasin)的测定方法。 本规程适用于牛乳基的婴幼儿配方乳粉和液态乳中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量的测 定。不适用于发酵乳制品和含水解或酶解酪蛋白产品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文本。 3.1A1β-酪蛋白 是β-酪蛋白的一种变异体，其一级氨基酸序列中第67号位氨基酸为组氨酸。 3.2 A2β-酪蛋白 是β-酪蛋白的一种变异体，其一级氨基酸序列中第67号位氨基酸为脯氨酸。 4方法原理 试样中的牛β-酪蛋白经尿素提取，二硫苏糖醇还原，碘乙酰胺烷基化，经胰蛋白酶酶解 为肽段，经液相色谱-三重四级杆质谱测定，同位素内标法定量。 5试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682 规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1碳酸氢钠(NaHCO )。 3 5.1.2 碳酸氢铵(NH HCO )。 4 3 5.1.3二硫苏糖醇(C H O S ，DTT)。 4 10 2 2 5.1.4碘代乙酰胺(ICH CONH ，IAA)。 2 2 T/CITS 0012—2022 5.1.5尿素。 5.1.6 乙酸(CH COOH)。 3 5.1.7 甲酸(HCOOH):色谱纯。 5.1.8 乙腈(CH CN):色谱纯。 3 5.1.9碱性胰蛋白酶:活力大于10000BAEE 每毫克蛋白质。 5.1.10牛β-酪蛋白标准品：纯度须准确标定，或经国家认证的标准物质。须依照附录A 方 法对牛β-酪蛋白标准品中A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白含量进行测定。 5.1.11牛A1β-酪蛋白特异肽标准品(序列: IHPFAQTQSLVYPFPGPIHNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK)，纯度不低于90%。 5.1.12牛A1β-酪蛋白同位素标记特异肽标准品(序列: IHPFAQTQS(L*)VYPFPGPIHNS(L*)PQNIPP(L*)TQTPVVVPPF(L*)QPEVMGVSK)，纯度不 低于90%。 5.1.13牛A2β-酪蛋白特异肽