金针菇液体菌种培养条件的研究.docxVIP

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金针菇液体菌种培养条件的研究 近年来,中国许多地区都积极发展了优质菌株,许多农民采用了传统的固体菌种栽培模式,生产周期长,污染率高,菌龄不一致等缺点。采用液体菌种具有生产周期短, 菌龄一致, 流动性好, 萌发快, 出菇齐、活力强, 污染率低, 有利于机械化操作等优点, 是金针菇工厂化生产发展的重要方向之一。为了充分发挥液体菌种在金针菇生产中的优势, 笔者采用摇瓶液体培养和发酵罐液体培养, 对金针菇菌种的液体培养条件及应用进行研究。 1 材料和方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验中的蘑菇 1.1.2 水琼脂糖凝胶水 (1) 斜面培养基 (PDA综合培养基) :马铃薯200 g, 葡萄糖20 g, KH2PO41g, MgSO4·7H2O 0.5g, VB110 mg, 琼脂20 g, 水1 000 mL, p H 6.8; (2) 一级液体菌种培养基:马铃薯20%, 蔗糖2%, 酵母膏0.2%, KH2PO40.1%, Mg SO4·7H2O0.05%, VB110 mg/L, p H 6.8; (3) 二级液体菌种培养基:玉米粉4%, 麸皮3%, 蔗糖2%, 磷酸二氢钾0.1%, 硫酸镁0.05%。 (4) 谷粒培养基:玉米粒98%, 石膏2%; (5) 棉子壳培养基:棉子壳80%, 麸皮12%, 玉米粉6%, 石膏2%。 1.2 测试方法 1.2.1 激活细菌 1.2.2 级液体菌种的制备 用500 mL三角瓶, 装一级液体菌种培养基150 mL, 121℃灭菌30 min, 冷却后无菌条件下接入约0.5 cm2斜面菌种3片, 使菌种片漂浮在液面上, 在23℃培养箱内静置培养24 h, 然后于23℃, 120 r/min振荡培养120 h, 得到一级液体菌种。 1.2.3 干重的测定 用500 mL三角瓶, 装二级液体菌种培养基150 mL, 121℃灭菌30 min, 冷却后无菌条件下接入10% (V/V) 的一级液体菌种, 于23℃, 150 r/min振荡培养120 h, 测定菌丝干重。每个处理5瓶, 设3个重复 (以下试验没有专门说明, 均采用3个重复) 。 1.2.4 级液体菌种培养 根据培养条件试验筛选出的最适培养条件 (p H值、温度、接种量) , 进行发酵罐液体菌种培养。采用10 L全自动发酵罐, 每罐装二级液体菌种培养基6 L, 培养基p H 6.5, 接入一级液体菌种, 接种量10% (V/V) , 培养温度 (22±1) ℃, 搅拌速度150 r/min, 通气量3L/min, 发酵培养144 h。每隔12 h取液体菌种20 mL, 测定菌丝干重。 1.3 液体辅助提取培养菌种干重 取5 mL发酵液, 置于60目筛网中过滤, 用蒸馏水充分洗涤, 真空泵抽滤, 然后置于60℃烘干至恒重, 用电子天平称重, 计算菌丝体干重。重复3次, 取平均值。 2 结果与分析 2.1 在蘑菇液体培养条件下 2.1.1 病原菌干重测定 将二级液体菌种培养基分别调节初始p H值为区间4.5~8.0八个处理, 采用二级液体菌种摇瓶培养120 h, 测定菌丝干重。试验结果表明:金针菇在培养基p H 4.5~8.0范围内均能生长, 在p H 6.5时, 菌丝生长量最大为1.682 g/100 mL, 故液体培养基初始最适p H为6.5 (图1) 。 2.1.2 病原菌病原菌发展 在16~30℃区间设置8个温度处理, 采用二级液体菌种摇瓶培养120 h, 测定菌丝干重。试验结果表明:菌丝体在温度16~28℃内均能生长, 在22℃条件下菌丝生长量最大为1.693 g/100 mL, 故液体培养最适温度为22℃ (图2) 。 2.1.3 不同的接种量对蘑菇丝的生长有影响 2.2 结果表明,针用液体防疫材料的应用 2.2.1 液体发酵过程中枯草芽孢杆菌生长情况测定 采用10 L全自动发酵罐进行液体菌种培养试验, 每隔12 h从出料口取液体菌种20 mL, 测定菌丝干重。试验结果表明:菌丝体在发酵罐内的生长过程表现出明显的迟缓期、增殖生长期、稳定期和衰亡期。培养84~96 h为菌丝生长稳定期, 此期菌丝干重达到最大值, 故培养到96 h为发酵罐液体菌种的培养终点 (图4) 。 2.2.2 液体培养基培养筛选 以发酵罐液体菌种培养到60 h~108 h, 每隔12 h从出料口取液体菌种, 接入固体培养基培养。每个处理接种5菌袋 (或瓶) , 设3个重复。菌丝发满天数如表1所示, 菌龄为84 h的液体菌种发菌速度明显快于其它菌龄的菌种。分析其原因有两点, 一是菌丝生物量大;二是菌丝生物活性高。故液体菌种的最佳菌龄为84 h。 2.2.3 培养基栽培试验 以上述试验确定的菌龄为84 h的液体菌种和传统的固体菌种, 分别接入棉子壳培养基栽培试

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