基因克隆的基本理论及实验技术.pptVIP

基因克隆的基本原理及实验技术;课时及内容安 排;第一课基因克隆的基本概念及理论知识;基因克隆的定义：;什么是基因？;染色体、DNA 与基因之间的关系;基因的结构及其表达蛋白的过程;RT-PCR扩增基因的编码区序列;转录起始调控区（启动子区）的扩增;基因的编码区及启动子区序列必须通过连接到质粒上构建成重组表达载体，然后进行目的片段扩增及功能讨论。;什么是质粒（Plasmid）？;质粒的重要特征;;限制性核酸内切酶;限制性核酸内切酶的命名法则; DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解供应的能量催化DNA链的5’-PO4与另一DNA链的3’-OH生成磷酸二酯键将两条紧邻DNA链连接起来。 ; 内切酶和连接酶是基因克隆实验中两种重要的工具酶，它们如同分子生物学家剪刀和针线，可以任意地将感爱好的基因片段进行切割和连接，实现DNA序列的重组。;质粒(plasmid)和载体(vector)有什么区分？;载体的种类;非定向克隆;TA克隆载体;T;酶切位点定向克隆的克隆载体;非定向克隆;EcoR I+Hind III切;表达载体;原核表达载体;真核表达载体;目的蛋白表达载体中的表达盒;基因克隆是将DNA或基因组的DNA片段嵌入 克隆载体，再将载体植入培育的宿主细胞， 进行载体扩增或表达蛋白。;大肠杆菌;;大肠杆菌在生物技术中的应用 ;生物平安性;基因克隆的实验常用菌株;质粒转化大肠杆菌的过程 ;基因克隆实验的一般过程;其次课基因克隆的操作过程及注意事项;基因克隆实验室平安事项;仪器设备的使用及维护;2. 离心机;3. 超净工作台;4. 恒温摇床及培育瓶;5. 恒温培育箱;6. 水浴槽;8. 电泳系统;分子克隆常用的有毒试剂; 3. 苯酚：苯酚又名酚或石碳酸,为高毒类原浆毒物,对人体危害严重。它的浓溶液对皮肤有强烈的腐蚀性,苯酚所致的急性中毒常常造成死亡。 4. 氯仿：三氯甲烷，侵入途径：吸入、食入、经皮汲取。健康危害：主要作用于中枢神经系统，具有麻醉作用，对心、肝、肾有损害。吸入或经皮肤汲取引起急性中毒，初期有头痛、头晕、恶心、呕吐、兴奋、皮肤粘膜有刺激症状，以后呈现???神紊乱、呼吸表浅、反向消灭、昏迷等，重者发生呼吸麻痹、心室纤维性颤动、并可有肝、肾损害。误服中毒时，胃有烧灼感、伴恶心、呕吐、腹痛、腹泻以后消灭麻醉症状。慢性中毒：主要引起肝脏损害，此外还有消化不良、乏力、头痛、失眠等症状，少数有肾损害。 5. 十二烷基硫酸钠（SDS）：提取质粒使用的溶液II中含有SDS，对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。可引起呼吸系统过敏性反应。。 6. 其它常用的试剂如强酸强碱都有很强的腐蚀性。;基因克隆相关实验;序列的查询与获得;输入基因名称 选择查询项目 点击“Go”;;蛋白质序列;;引物设计及质粒图谱绘制;基因克隆的基本原理及实验技术;课时及内容安 排;第一课基因克隆的基本概念及理论知识;基因克隆的定义：;什么是基因？;染色体、DNA 与基因之间的关系;基因的结构及其表达蛋白的过程;RT-PCR扩增基因的编码区序列;转录起始调控区（启动子区）的扩增;基因的编码区及启动子区序列必须通过连接到质粒上构建成重组表达载体，然后进行目的片段扩增及功能讨论。;什么是质粒（Plasmid）？;质粒的重要特征;;限制性核酸内切酶;限制性核酸内切酶的命名法则; DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解供应的能量催化DNA链的5’-PO4与另一DNA链的3’-OH生成磷酸二酯键将两条紧邻DNA链连接起来。 ; 内切酶和连接酶是基因克隆实验中两种重要的工具酶，它们如同分子生物学家剪刀和针线，可以任意地将感爱好的基因片段进行切割和连接，实现DNA序列的重组。;质粒(plasmid)和载体(vector)有什么区分？;载体的种类;非定向克隆;TA克隆载体;T;酶切位点定向克隆的克隆载体;非定向克隆;EcoR I+Hind III切;表达载体;原核表达载体;真核表达载体;目的蛋白表达载体中的表达盒;基因克隆是将DNA或基因组的DNA片段嵌入 克隆载体，再将载体植入培育的宿主细胞， 进行载体扩增或表达蛋白。;大肠杆菌;;大肠杆菌在生物技术中的应用 ;生物平安性;基因克隆的实验常用菌株;质粒转化大肠杆菌的过程 ;基因克隆实验的一般过程;其次课基因克隆的操作过程及注意事项;基因克隆实验室平安事项;仪器设备的使用及维护;2. 离心机;3. 超净工作台;4. 恒温摇床及培育瓶;5. 恒温培育箱;6.