毛细管电泳技术及应用.pptVIP

第二十九页，共六十八页，2022年，8月28日 仪器流程与主要部件 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L） 第三十页，共六十八页，2022年，8月28日 1.高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 第三十一页，共六十八页，2022年，8月28日 3.缓冲液池 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置； 第三十二页，共六十八页，2022年，8月28日 CE具体操作步骤： 毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。 1).清洗毛细管 对于一根新的或久未使用的毛细管，需用1mol/L的NaOH溶液、0.1mol/L NaOH溶液、超纯水依次清洗。在有些情况下还需用0.1mol/LHCl、甲醇或去垢剂清洗,强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子，甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质。 第三十三页，共六十八页，2022年，8月28日 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3 min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。 第三十四页，共六十八页，2022年，8月28日 2). 更替电泳缓冲液 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3 min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。 上一步清洗过程结束后，毛细管和电极从清洗液中移至电泳缓冲液，不可避免地将强碱或强酸等溶液带至其中。缓冲液本身也会因挥发、电泳等而改变其离子强度。因此对于精确分析，每分析五次后需更换一次样品盘中的缓冲液。一般分析，半天更换一次即可。 第三十五页，共六十八页，2022年，8月28日 3）毛细管电泳的进样方式 进样量：毛细管长度的1%-2%；nL级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样 第三十六页，共六十八页，2022年，8月28日 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 2. 电动进样方式 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样； 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 第三十七页，共六十八页，2022年，8月28日 Buffer: 50 mM phosphate –TEA (pH 2.5) with 4.0% HP-β-CD (w/v) and 50% methanol; Applied potential: 30 kV; Sample: 1 mg/L propranolol dissolved in (A) (B) water, (C) methanol; (A) Pressure injection 0.5 psi., 5 s, (B) (C) electrokinetic injection 10 kV, 5 s. C A B Effect of injection mode 第三十八页，共六十八页，2022年，8月28日 (A)Conditioning of the capillary with a low pH buffer containing CTAB, and injection of a long water plug into the capillary by pressure; (B) Field-amplified injection of cations and stacking on the