NYT 713-2003香草兰豆荚中香兰素的测定.pdf

NY/T 713---2003前言本标准修改采用ISO5562-2：1999《香荚兰测试方法》（英文版）。本标准根据ISO 5562-2：1999重新起草。在附录A中列出了本标准章条编号与ISO标准5562-2：1999章条编号的对照一览表。考虑到我国国情，在采用ISO 5562-2:1999时，本标准做了一些修改。有关技术性差异已编人正文中并在它们所涉及的条款的页边空白处用垂直单线标识。在附录B中给出了这些技术性差异及其原因的一览表以供参考。本标准的附录 A、附录 B均为资料性附录。本标准由农业部农垦局提出。本标准起草单位：农业部热带农业产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：彭黎旭、方佳、吴莉宇、贺利民、冯信平、王明月、刘洪升。1 NY/T 713-—2003香草兰豆荚中香兰素的测定1范围本标准规定了属于 Vanilla fragrans(Salisbury） Ames 和 syn. Vanilla planifolia Andrews 种的香草兰中香兰素测定方法。本标准适用于香草兰豆荚、切段和粉末中香兰素的测定。本标准不适用于香草兰豆荚抽提物中香兰素的测定。本标准描述了分析香兰素的三个分析方法：a）高效液相色谱法；b）紫外分光光度法；c）气相色谱法。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T12806实验室玻璃仪器单标线容量瓶3高效液相色谱法（仲裁方法）3.1原理试样进行抽提和稀释，加人内标物，用高效液相色谱法（HPLC)分离，再用紫外检测器测定香兰素的含量。3.2试剂分析纯试剂、蒸馏水、去离子水或相等纯度的水。3.2.1乙醇,95%（体积分数）。3.2.2 甲醇。3.2.3 磷酸溶液:c(H,PO4)=0. 0i mol/L。3.2.4流动相：用25份甲醇(3.2.2)与75份稀磷酸(3.2.3)混合。用膜(3.3.3)过滤、脱气。3.2.5香兰素（4-羟基-3-甲氧基苯甲醛）为对照标样，纯度大于99%。3.2.6内标物：乙酰水杨酸，纯度大于99%。3.2.7香兰素储备液：称取一定量的香兰素（3.2.5），精确至0.001g。用流动相配制成为浓度为1g/L的标准储备液。3.2.8工作溶液用流动相（3.2.4)稀释储备液（3.2.7），获得工作溶液，使工作溶液的浓度符合3.2.8.1中的要求。香兰素工作溶液浓度为0.1 g/I,可在 4℃下暗处保存不超过10天。3.2.9内标物溶液将乙酰水杨酸(3.2.6)溶解于流动相(3.2.4)中，使其浓度为0.6g/L，称量时精确至0.001g。注：内标浓度应与样品溶液中香兰素浓度基本一致。3.3仪器3.3.1气密研磨器。1 NY/T 713-20033.3.2单标容量瓶，容量为100mL和200mL,符合GB/T12806的要求。3.3.3过滤膜，孔径为0.45μm。3.3.4连续型索氏抽提仪，由下列部件组成（见图1）。图1连续型索氏抽提仪-125 mL索氏抽提器。一冷凝器。-250mL磨口烧瓶。热源：带有滑动变阻器或其他控热方式的电热套或油浴。3.3.5高效液相色谱仪：-紫外检测器；进样装置；色谱柱:Cis硅胶柱,5 μm~10 μm 粒径。3.3.6注射器：用于高效液相色谱。3.3.7分析天平,精确度为0.001 g。3.4试样的制备将样品（香草兰豆荚、切段或香草兰粉)研磨并使之充分混匀。3.5称样称20g已制备好的样品，准确至0.001g。3.6抽提在抽提仪器（3.3.4)中用大约200mL乙醇（3.2.1)抽提试样（3.5)16h，即溶剂进行25次～30次循环。每一100g豆荚用1L溶剂抽提。将抽提物转移至一个200mL的容量瓶（3.3.2)中。用少量的乙醇清洗抽提仪器中的烧瓶数次，并将洗出液加人容量瓶中，乙醇定容并混合均匀。用流动相稀释该溶液10倍。2 NY/T 713-20033.7分析步骤3.7.1色谱操作条件流动相(3.2.4)流速大约为1 mL/min，在3.3.5规定的条件下室温进行分析。3.7.2校准3.7.2.1对照标准品和内标物分别进样，然后两者混合起来进样。调整操作条件使内标和样品蜂的分辨率大于1。3.7.2.2经过膜（3.3.3)过滤后3.6中制备的样品上机测定。3.7.2.3用10mL内标物与10mL3.2.7所得到的标准溶液混合。用膜过滤上机进样测定峰高或峰面积。校正因子(k:)由式(1)给出。m: Xh.k; =.(1)m. Xh.式中:k-待测定的组份中组份i的响应系数;上机溶液中组份i中的质量，单位为毫