SN_T 3858-2014出口食品中异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3858---2014出口食品中异抗坏血酸的测定高效液相色谱法Determination of erythorbic acid in food for export-HPLC method2014-08-01实施2014-01-13发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3858-—2014前創言本标准按照 GB/T 1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局技术中心、中华人民共和国镇江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张志刚、陈达捷、赵鹏、徐敦明、张缙。I SN/T 3858--2014出口食品中异抗坏血酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了出口食品中异抗坏血酸的高效液相色谱检测方法。葡萄酒、醋、啤酒、牛奶中异抗坏血酸的本标准适用于肉类罐头、鱼肉罐测定。2规范性引用文件日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文下列文件对于本文件的应用是必不可件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版木(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法3方法提要二胺衍生成具有强荧光性的物质，用试样中异抗坏血酸采用水提取，经活性炭催化月配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定外标法定量4试剂和材料6682 中一级水的要求。，析纯，试验用水应符合GBT除特殊注明外,所有试剂均为4.1乙腈：液相色谱纯。甲醇。4.2乙酸钠。4.34.4 冰乙酸。4.5邻苯二胺：液相色谱纯。十二水合磷酸氢二钠（Na²HPO4·12H2O)。4.64.7磷酸。4.8活性炭粉：200目。4.9＇标准品：异抗坏血酸标准品，纯度大于等于99%,CAS号：89-65-6。4.10乙酸钠缓冲溶液：称取30.13g乙酸钠溶解于80mL水中，用冰乙酸调节pH值至5.0后，用水定容至100mL,备用。4.1120 mmol/L邻苯二胺甲醇溶液:称取邻苯二胺2.16 g,溶解于 1 L 的甲醇中,备用。4.1220 mmol/LNazHPO4溶液：称取7.16g NazHPO4·12H,O溶解于1L水中，用磷酸调节pH值至7.0,备用。4.13标准储备液：称取适量异抗坏血酸标准品（精确至0.1mg），用水配制成100mg/L的储备液，避光保存，标准及衍生后产物保存时间为24 h。1 SN/T 3858—20145仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器（FLD）。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3离心机：转速不低于 4 000 r/min。5.4冷冻离心机：转速不低于4 000 r/min。5.5高速均质器：18 000 r/min。5.6组织捣碎机。5.7微孔滤膜:0.2 μm,水相。61试样制备、保存6.1试样制备至少取同一批次3个最小完整包装样品（混合后的固体样品总量100g～500g，液体样品100mL～500mL)，固体或半固体样品用组织捣碎机粉碎混匀，液体样品混合均匀，混匀后样品置于密闭容器中，待称样处理，样品制备后应尽快完成试验。6.2试样保存试样于0℃～4℃密封保存；在制样的操作过程中及样品保存期间，应避免样品长时间与大量空气接触，防止样品中被测物质受到氧化导致被测物含量发生变化。7 测定步骤7.1试样处理7.1.1试样提取固体试样：称取样品10g（精确至0.01g），加人水15mL，用均质器均质后，4000r/min离心3min，移取上层液体，再加人15mL水，经相同方法处理后，合并两次提取液，用水定容至100.0mL,混匀后待衍生化。液体试样：称取试样10g(精确至0.01g)，用水定容至100.0mL，混匀后待衍生化。7.1.2试样衍生化取上述提取液50mL，加人活性炭粉（4.8)2.0g，置于250mL锥形瓶中，剧烈摇动5min，用定性滤纸过滤，取滤液2.00mL置于10mL容量瓶中，加人乙酸钠缓冲溶液（4.10)2.0mL，再加人5.0mL邻苯二胺甲醇溶液（4.11），充分摇匀后，避光条件下放置35min后用水定容至10.0mL，混匀后过微孔滤膜(5.7)后,供 HPLC测定。7.2测定7.2.1色谱条件色谱条件如下：a）色谱柱:Cig柱,250 mmX4.6 mm(内径),5 μm,或相当者;2 SN/T 3858—2014b）流动相:20 mmol/LNa2HPO4溶液(4.12)+乙腈(90+10,体积比）;c)流速:1.0 mL/min;d）波长：激发波长346 nm，发射波长 428nm；e)进样量：20 μL;f)柱温:30℃。7.2.2标准曲线的绘制将标准储备液（4.13)用水稀释至浓