SN_T 2643-2010泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2643—2010泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法Cultivar identification and purity detection of Thai Jasmine rice2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发 布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2643—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、五洲检验（泰国）有限公司。本标准主要起草人：吴亚君、张振民、陈颖、王斌、徐宝梁、刘建国、黄文胜、袁飞 SN/T2643—2010泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法1范围本标准规定了泰国茉莉香米品种鉴定和纯度检验的DN.A检验法、感官检验法和水煮检验法。本标准适用于泰国茉莉香米中香米法定品种KDML105和RD15的鉴别和纯度检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不町步的。凡是法E期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T0798进出口粮油、饲料检验名词术语SN/T0800.1进出口粮油、饲料检验抽样和制样SN/T1193基因检验实验室报术要求3术语和定义SN/T0798界定的以及下列术语和定准适用手本文件3.1rice: That Hond Mali re; Thai Frangtant rice泰国茉莉香米ThaiJasmine经泰国农业局、农业部和合作社注册的非糯性芳香水稻品种KaoDbkMali105或RD15的稻谷经碾磨获得的糙米或精米。3. 2品种纯度vatietal purity本品种的质量占试样的百分率。3.3聚合酶链式反应polymerasechainreaction；PCR用于扩增位于两段已知序列之间DNA（deoxyribonucleosideaacid，脱氧核糖核酸）的方法。模板DNA经过高温变性成单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条互不互补的寡核苷酸片段即引物分别与模板DNA两条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以4种dNTP为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火和DNA合成这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增，经25个～30个扩增循环，扩增倍数达到约106。3. 4随机扩增多态性分析randomamplificationpolymorphicDNA;RAPD利用一系列随机排列的寡核苷酸（通常为十聚体）为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增。扩增产物通过聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离后，经EB染色或放射自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。 SN/T2643—20104DNA检验法4.1原理通过RAPD中RI2-449目标条带和普通PCR中RI5S目标条带是否阴性来鉴定样品是否为泰国茉莉香米法定品种；通过对样品中随机挑选的44个米粒分别检验来计算样品中泰国茉莉香米的品种纯度。4.2抽样与制样按照SN/T0800.1的规定执行。4.3试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。4.3.1检测引物序列RI2:5TGCTGCAGGT3RI5-F:5ATACGCTCGCATATATCTAC3RI5-R:5GAACGGACTCCAAGATGCAA34.3.2TaqDNA聚合酶（Taq，Thermusaquaticu，水生栖热菌）。4.3.3dNTPs（deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷酸三磷酸）：dATP（deoxyadenosinetriphosphate，脱氧腺苷三磷酸）、dTTP（deoxythymidinetriphosphate，脱氧胸苷三磷酸）、dCTP（deoxy-cytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸）、dGTP（deoxyguanosinetriphosphate，脱氧鸟苷三磷酸）。4.3.4琼脂糖：电泳纯。4.3.5溴化乙锭。4.3.6三氯甲烷。4.3.7无水乙醇。4.3.870%乙醇。4.3.9DNA分子量标准品（100bp~2000bp）。4.3.10裂解液：1%CTAB（cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵），0.05mol/LTris-HCl(pH8.0）［Tris-：tris（hydroxymethyl）a