SN 1087-2002牛Q热微量补体结合试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1087---2002牛Q热微量补体结合试验操作规程Procedure of micro-complement fixation testfor bovine Q fever2002-09-01实施2002-03~15发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1087—2002前言本标准按照GB/T1.1一1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第.1部分：标准编写的基本规定》的要求，对原《中华人民共和国进出境动物检疫规程手册》（1997年12月）中的牛Q热微量补体结舍试验”进行修订。本标准的附录A是标准的附录。本标由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、广州出人境检验检疫局。本标准主要起草人：柯忠哲、朱世强、林志雄、张立怀、范华炜。本标准系首次发表的检验检疫行业标准。 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛Q热微量补体结合试验操作规程SN/T 1087-2002Procedure of micro-complement fixation testfor bovine Q fever1范围本标推规定了牛Q热微量补体结舍试验的操作技术要求。本标准适用于牛、羊Q热微量补体结合试验抗体的检测，其他哺乳动物可以参照本标准。2 引用标准下列标推所包含的条文，通过在本标中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标推都被修订，使用本标的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法3器材及试剂3.1器材3.1.1微量板：U型底96孔板。3.1.2加样器;8道5μL～50μL可调式移液器，10μL～750uL可调式移液器。3.1.3各种规格塑料滴头、刻度玻璃吸管、试管、试管架。3.1.4离心机：低速，使用水平转子。3.1.5水浴锅：可调节温度。3.2试剂3.2.1抗原：按说明保存和使用。3.2.2标准抗原：按说明保存和使用。3.2.3标准阳性血清：按说明保存和使用。3.2.4标准阴性血清：按说明保存和使用。3.2.5被检血清：从被检动物静脉采血，分离血清，4℃保存。3.2.6补体：按说明保存和使用。3.2.7溶血素：按说明保存和使用。3.2.8试验用蒸馏水为GB/T6682中的三级水。4预备试验4.12%缩羊红细胞悬液：采成年绵羊血，一份血加1.2倍量的阿氏液，混匀，4℃保存，5d后备用。使用前摇匀，取出10mL，用离心机以2000r/min离心5min，弃去上清液，将下沉的红细胞泥用20倍量巴比妥缓冲液（VBD)洗涤，以2000r/min离心5min，重复洗涤兰次，最后一次离心10min。取下沉的红细胞泥用VBD配制成2%(V/V)悬液。4.2溶血索效价的测定中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-03-15批准2002~09-01实施1 SN/T 1087—20024.2.1溶血素的稀释:取溶血素 0.1 mL加VBD 9.9 mL混匀(如果是等量甘油保存的溶液,取溶血素0.2mL加VBD9.8mL），制成100倍稀释的溶血素，再按表1稀释成不同倍数。表 1溶血素的稀释表试管号2458936稀释倍数5 0002 0002 5003 0004 0006 0005001 0001 500成分0. 10. 10.10.10. 0. 11:100 溶血素/mL1. 4 1. 92. 4 2. 93. 0.9VBD/mL1. 01. 52. 02. 53.04. 05.06.0总量/mL1. 0补体的稀释按表2对补体做不同倍数的稀释。4.2.2表 2补体的稀释表试管释倍数2030607080901004050.成分0. 050. 050.10. 050. 050. 050.050. 050. 05补体/mL4. 951.91. 451. 952. 452. 953. 453. 954. 45VBD/mL2. 02. 53. 03. 54. 04. 55.02. 0总量/mL致敏红细胞悬液的制备：将不同稀释度(1：500～1；6000)的溶血素与等量的2%红细胞悬液混合，置37℃水浴15min，为致敏红细胞。4.2.4溶血素效价的滴定：采用方阵法在微量板上滴定。如表3所示，1～9列为溶血素稀释度（1：500～1：6 000),A～H行为补体稀释度(1：30～1：100）。吸取不同稀释度的致敏红细胞悬液50uL，分别滴加于1～9列的各孔中。吸取不同稀释度的补体50uL，分别滴于A～H行各孔中，每孔再加25μLVBD,滴加完毕后，置微量振荡器上混匀，随后置37C温箱中感作30min后进行初判，置室温2h、水平转