SN_T 4288-2015Optimum Intrasect中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4288—2015OptimumIntrasect中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of qualitative polymerase chain reaction method for detecting geneticallymodified corn line Optimum Intrasect2016-04-01实施2015-09-02发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T4288—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：黄新、凌杏园、潘良文、张丽丽、朱水芳、陈洪俊、段胜男。一 SN/T4288—2015OptimumIntrasect中转基因成分定性PCR检测方法1范围本标准规定了转基因玉米OptimumIntrasect中转基因成分定性实时荧光PCR检测方法。本标准适用于单粒玉米复合性状品系OptimumIntrasect（MON810×TC1507×NK603）的检测，但不适合玉米加工产品中该品系成分的检测。本标准中检测方法还适用于玉米及其产品中转基因单转化事件Bt11、GA21、MON810、MON863、MON89034、TC1507、NK603、T25、MON88017、59122、MIR604、MIR162、LY038、3272和MON87460的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1—2004转基因产品检测通用要求和定义GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1转基因复合性状品系stackedgeneticallymodifiedplants是由两个和两个以上单转化事件（transgenicevent)通过杂交或单转化事件再转化形成的叠合了两个和两个以上性状的转基因新品系。3.1.2Optimum Intrasect是由杜邦先锋公司研发的转基因玉米复合品系，由单转化事件MON810，TC1507，NK603通过常规杂交育成，叠合了源于品系MON810的抗虫性状和源于品系TC1507和NK603的耐除草剂草丁麟和草甘麟性状。已在美国、日本、加拿大、巴西和阿根廷等国家获得批准商业化。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。Adhl（AlcoholDehydrogenase）：乙醇脱氢酶基因1 SN/T4288—2015bp(basepair）：碱基对Ct值（C：Cycle，t：threshold)：每个反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数CTAB（cetyltrithylammoniumbromide）：十六烷基三甲基溴化铵DNA（deoxyribonucleicacid）：脱氧核糖核酸EDTA（ethylenediaminetetraaceticacid)：乙二胺四乙酸PCR(polymerasechainreaction）：简称PCRTaq（Thermusaquaticu）：水生栖热菌TE：Tris-HCI、EDTA缓冲液TM(meltingtemperature）：熔解温度Tris[tris (hydroxymethyl)以田氨基甲烷UNG酶（uracil-N-glycosylalase）：尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）酶Zein：玉米醇溶蛋白基因4方法提要PCR反应过程中，荧光信号的累积与PCR产形成呈正相关，根据荧光信号的强度和扩增曲线Ct值判定样品中是否含有特定的转基因玉米转化事件由于现阶段已知转基因玉米复合品系均由已知的单转化事件玉米杂交而成。在复合性状品系中，这些单转化事件的边界序列未发生改变，因此，通过对单粒玉米不同单转化事件玉米的检测，就可以判断该种子是由哪些单转化事件叠合而成。5主要仪器及试剂5.1主要仪器实时荧光PCR仪；冷冻研磨仪；消灭菌锅：制冰机：核酸蛋白分析仪；高速冷冻离心机，台式小型离心机，Mini个人离心机；低温冰箱：旋涡震荡器：微量移液器，生物安全柜。5.2主要试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化诺剂。实验用水应符合GB/T66