SN_T 1673-2013传染性皮下和造血器官坏死检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1673---2013代替SN/T 1673--2005传染性皮下和造血器坏死检疫技术规范Quarantine protocol for infectious hypodermal and haematopoietic necrosis2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局球 SN/T 1673—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1673一2005《对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒聚合酶链反应操作规程》。本标准与SN/T1673--2005相比，除编辑性修改外主要技术性变化如下：增加了临床诊断；-增加了实时荧光PCR方法；一增加了斑点杂交方法；-增加了原位杂交方法；增加了综合评定。本标准主要参考OIE标准《水生动物疾病诊断手册》（2009年版)第2.2.2章中介绍的方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国海南出入境检验检疫局。本标准主要起草人：张娜、何俊强、黄纪徽、卓金焕、郑枢、史秀杰、庄广儒、曾建红。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1673-2005。1 SN/T 1673—2013传染性皮下和造血器官坏死检疫技术规范1 范围本标准规定了进出口对虾中传染性皮下和造血器官坏死的现场检疫和聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光PCR方法、原位杂交方法和斑点杂交方法实验室检验方法。本标准适用于进出口对虾中传染性皮下和造血器官坏死的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。IHHN:传染性皮下和造血器宫坏死IHHNV:传染性皮下和造血器官坏死病毒PCR:聚合酶链式反应Real-Time PCR:实时荧光 PCRRDS:慢性矮小残缺综合症4概述传染性皮下和造血器官坏死（IHHN)是由传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV)引起的，IHHN 的流行病学、病原特性等参见附录 A。5 实验室诊断5.1仪器和设备5.1.1 PCR扩增仪。5.1.2紫外观察灯或凝胶成像仪，5.1.3荧光定量PCR仪。5.1.4高速冷冻离心机。5.1.5玻璃研磨棒或塑料研磨棒。5.1.67水浴锅：室温至100℃。5.1.7塑料封口机：可满足5cm以上杂交袋热塑封口，溶液溢出到电阻丝或外壳上时不会发出漏电。 SN/T 1673--20135.1.8暗盒：可用任何能避免强光直射的盒子或袋子代替。硝酸纤维素膜。5. 1.9杂交袋。5.1.10电炉或其他加热设备：可满足200mL～2000mL水在散口容器中沸腾10min。5.1.11程控组织脱水机或常规手工脱水。5.1. 12程控组织包埋机或常规手工包埋。5. 1. 13展片水浴锅:室温～50℃。5.1.14切片烘干机：室温～100℃。5.1.15切片染色缸。5.1. 165. 1. 17切片保湿孵育箱。5.2试剂和材料所用水若非注明，应符合 GBIT 6682中一级水的规格。.2若非注明,本标准使用试剂为分析纯。5.2.3聚合酶链式反应(PCR)扩增反应引物a）PCR扩增引物：389F : 5-CGG-AAC-ACA-ACC-CGA-CTT-TA-3 *389R: 5-GGC-CAA-GAC-CAAfAAT-ACG-AA-3浓度为40 μmol/L,扩增长度为389 bp的基因片段（参见附录B)。b）PCR扩增引物：77012F:5-ATC-GGT-GCA-CTA-CTC-GGA-377353R:5-TCG-TAC-TGG-CTG-TTC-ATC-3浓度为40 μmol/L,扩增长度为356 bp的基因片段。c）PCR扩增引物：392F : 5-GGG-CGA-ACC-AGAATC-ACT-TA-3392R: 5-ATC-CGG-AGG-AAT-CTGATG-TG-3浓度为40 μmol/L,扩增长度为392bp的基因片段。d）PCR扩增引物：309F:5-TCC-AAC-ACT-TAG-TCA-AAA-CCA-A-3309R:5-TGT-CTG-CTA-CGA-TGA-TTA-TCC-A-3浓度为40μmol/L,扩增长度为309·bp的基因片段。e）PCR扩增引物：MG831F:5-TTG-GGG-ATG-CAG-CAA-TAT-CT-3MG831R:5-GTC-CAT-CCA-CTG-ATC-GG