SN_T 4052-2014出口保健食品中荷叶碱的测定.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4052—2014出口保健食品中荷叶碱的测定Determination of nuciferine in health foods for export2015-05-01实施2014-11-19 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局涂层弯真伪 SN/T 4052-~2014前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出人境检验检疫局、湖南省检验检疫科学技术研究院。本标准主要起草人：焦艳娜、颜鸿飞、付善良、王美玲、李拥军、张莹、黄志强。I SN/T 4052—2014出口保健食品中荷叶碱的测定1范围本标准规定了保健食品中荷叶碱的两种测定方法，即液相色谱-质谱/质谱法和高效液相色谱法。本标准适用于降脂胶囊、减肥咀嚼片和减肥茶中荷叶碱的定量测定和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法液相色谱-质谱/质谱法3原理试样中的荷叶碱用甲醇超声提取，提取液经稀释后进样，高效液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇:液相色谱级。4.2乙腈：液相色谱级。4.3 乙酸。4.40.1%乙酸溶液：准确移取1mL乙酸（4.3），用水稀释至1000mL。4.5甲醇-水混合溶液（1十1，体积比）：量取100mI甲醇，加人100mL水，混匀备用。4.6荷叶碱标准品（CAS号：475-83-2，分子式：C19H21NO2）：纯度≥99%。4.7荷叶碱标准贮备液：准确称取适量的荷叶碱标准品，用甲醇溶解，配制成浓度为1.0mg/mL的标准贮备溶液，0℃～4℃下避光保存。4.8荷叶碱标准工作溶液：准确移取-定体积的标准储备溶液，根据需要用甲醇-水混合溶液（4.5)稀释成不同浓度系列的标准工作溶液。5仪器5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。5.2　超声仪。5.3粉碎机。5.4分析天平：感量为0.0001g和0.01g。1 SN/T 4052—20145.5离心机（最大转速 10 000 r/min）。61试样制备与保存6.1试样制备取20粒片剂粉碎后，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内；取20粒胶囊试样连同胶囊壳一起粉碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。减肥茶试样取5包～10包充分混匀，粉碎后均分成两份，分别装人洁净容器内。6.2试样的保存将试样于0℃～4℃下保存。在取样、制样过程中，应防止样品受到污染或发生目标物含量的变化。7 测定步骤7.1提取称取1g（精确至0.01g)试样于50 ml.具塞锥形瓶中,加人30:mL甲醇超声提取30min。取出冷却至室温，将样品全部转移至50mL容量瓶中：，用15mI甲醇分数次清洗锥形瓶，合并清洗液至容量瓶中并用甲醇定容至刻度，摇匀后，静置5min。移取5mL提取液至-15mL离心管中，在6000r/min离心5min后，取0.5mL上清液，加人0.5mL甲醇-水混合溶液（4.5），混匀后过0.45μm有机微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪分析。7.2测定7.2.1液相色谱条件液相色谱条件如下：a)色谱柱：Ci8柱（粒径5um,柱长150mm，内径4.6mm)或相当者；b)流动相：梯度洗脱程序见表1；c)流速:0.5 mL/min;d)柱温:30℃;e)进样量：10 μL。表1流动相梯度洗脱程序时间0.1%乙酸水溶液乙腈min%%0901046040 10109012109012.190101590102 SN/T 4052--20147.2.2质谱条件参见附录 A。7.2.3液相色谱-质谱检测及确证定量测定按照7.2.1色谱条件和7.2.2质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标法定量。待测样液中荷叶碱的量应在标准曲线范围之内，如果超出标准曲线范围，应稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下，荷叶碱的参考保留时间为7.26 min。.标准溶液的选择离子色谱图参见附录B中的图B.1。定性测定在相同的实验条件下,样液中被测物的色谱峰保留时间与标准工作液相同，并且在扣除背景后的样液谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表2规定的范围内，则可判断样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差允许的相对偏差相对离子丰度%%±2050±2520