SN_T 4857-2017国境口岸肠出血性大肠埃希菌O104:H4检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4857—2017国境口岸肠出血性大肠埃希菌O104:H4 检验方法Method for detection of EHEC O104 :H4 at frontier port2017-07-21 发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局甜涂店E SN/T 4857—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中国疾病预防控制中心传染病控制所。本标准主要起草人：涂承宁、赵俊华、冯子力、熊衍文、闫文莲、莫秋华、谭华、叶立青。 SN/T 4857—2017国境口岸肠出血性大肠埃希菌0104：H4检验方法1范围本标准规定了国境口岸检验的检测流程、样品采集与运输、样品处理、检验和报告。本标准适用于对国境口岸粪便及呕吐物、可疑食品和水样中志贺样毒素的筛查、EHECO104：H4筛查和分离培养。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB/T4789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB/T5750.2生活饮用水标准检验方法水样的采集和保存3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1肠出血性大肠埃希菌Enterohemorrhagic escherichia coli;EHEC一种能产生志贺样毒素（Shiga toxin，又称维罗毒素，Veto 毒素，Verotoxin)的致泻性大肠埃希菌，可引起出血性肠炎（hemorrhagic colitis，HC）和溶血性尿毒症综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）。根据其菌体抗原（O)血清型和鞭毛抗原（H）血清型，可分为)157：H7、O104：H4等一百余种，详参见附录A。4　对象4.1EHEC O104:H4感染或疑似感染病例的排泄物、呕吐物。4.2被EHEC O104:H4污染或有EHEC O104:H4污染嫌疑的食品和水样。5检测流程图EHECO104:H4检测流程图见图1。T SN/T 4857--2017其他样本粪便和呕吐物增菌36 ℃±1℃Vero毒素筛查0104筛查(可选)免疫磁珠富集(可选)麦康凯或EMB36℃±1℃↓18 h～~24 h挑取可疑菌落进行氧化酶，染色并分纯培养生化试验血清学试验Vero毒素检测其他基因或毒力因子检测(可选)报告图1EHEC O104:H4 检测流程图6样本采集6.1样本采集原则6.1.1采集标本以病人粪便为主，粪便标本应争取在发病早期、服用抗菌药物之前采集，并尽快送到实验室。可同时采取可疑食品、水样和环境样本进行检测，6.1.2水样便采取1 mL～3mL，成形便采取指甲盖大小的粪便量。病人的呕吐物、沾染粪便的衣物和尸体的肠内容物亦可作为检材。6.1.3采集样本时应注意避免交叉污染，6.1.4采集样本时，应戴上乳胶手套和口罩。样本采集完毕，尽快消毒洗手。2 SN/T 4857—20176.2粪便的采集6.2.1拭子采样法用直肠棉拭或采便管由肛门插人直肠内3cm～5cm处采取。应注意棉大小适宜，避免采便量过少。6.2.2座厕采样法戴上乳胶手套，取一螺旋式密封、已消毒、干燥的容器并做好唯一性标识；使用座厕时，指导病人将经消毒的厨用塑料围裙挂在座厕后背上，将围裙体部置于座厕坐板上，使能更方便地获得粪便样本，但应避免尿液混和。尽可能多地将粪便样本采集到上述容器中（推荐采集到10 mL以上）,置2℃～8℃保存并于2h内送检。如果没有座厕，可使用糖瓷便盆。指导病人将围裙体部置于便盆上（如果便盆经过高压消毒，也可不用围裙），使能更方便地获得粪便样本，但应避免尿液混和。如果是使用了纸尿布且不会使用座厕的婴幼儿，可将塑料围裙沿着纸尿布边缘放人纸尿布中，如果放置得当，可使粪便和尿液的混合减到最少，从而获得一个较好的样本。6.3呕吐物样本采集采集自然呕吐的呕吐物于灭菌容器中,水样呕吐物采集1mL～3ml,非水样呕吐物采集1g～3g。6.4水样采集按GB/T5750.2要求进行。6.5可疑食品采集按GB4789.1要求进行。7运输与保存采集的样本应按规定作好标识放专用送样箱中,2℃～8℃保存并于2h内送检。采得的标本不能立即检查的，应接种于保存培养基内（如文腊氏保存液或Cary-Blair二氏半固体保存培养基）尽快送往实验室。送检标本时应填写送检单。8检验程序8.1准备8.1.1对检疫查验、卫生监督或疫情监测的记录进行整理。8.1.2对所采集的样本应进行唯一性