SN 1224-2003鸡败学支原体感染抗体检测方法 血清凝集试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1224—2003鸡败血支原体感染抗体检测方法快速血清凝集试验The detection of antibodies against Mycoplasma gallisepticum in infectedchickensProtocol of a rapid serum agglutination test2003-05-28发布2003-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫准行业标鸡败血支原体感染抗体检测方法快速血清凝集试验SN/T 1224—2003*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张1/2字数 10千字2003年9月第一版2003年9月第一次印刷印数 1—2 000*书号：155066·2-15296网址 版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1224—2003前言本标准的附录 A是规范性附录。本标由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈书琨、叶奕优、骆德海。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。I SN/T 1224—2003鸡败血支原体感染抗体检测方法快速血清凝集试验1范围本标准规定了鸡败血支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）感染快速血清凝集试验的操作方法。本标准同时也规定了火鸡MG感染快速血清凝集试验的操作方法。本标准适用于鸡、火鸡 MG感染血清抗体的检测。2原理MG感染鸡或者火鸡后,感染动物即可产生特异性的免疫球蛋白 M(IgM)抗体。IgM 与细胞膜抗原结合的活性较强，并能对细胞起调理作用。因此，IgM在体外与抗原结合后主要表现为凝集反应。一般在感染七天后，受染动物的血清中就可检测到快速血清凝集(RSA)试验抗体。由于RSA试验具有操作简便、快速、灵敏等优点，所以它是目前血清学检測禽支原体感染的最常用的方法。3 试剂与器材3. 1 试剂3.1.1RSA抗原：可以从成都药械厂或中国兽药监察所等单位购买，于2℃～8℃保存，避免冻融。3.1.2MG 阳性血清：向 RSA 抗原提供单位购买。3.1.3MG阴性血清：向 RSA抗原提供单位购买。3.2器材3.2. 1一次性使用塑料注射器（规格1 mL用于小鸡，或者 2.5 mL用于中鸡或成年鸡）。3.2.23灭菌的 1.5 mL微量离心管和0.5 mL微量离心管。3.2.32200 μL可调移液器。3.2. 4200 μL灭菌的滴头。3.2.5干燥灭菌白瓷反应板或者载玻片。3.2.675%的酒精棉球。4操作方法4.1 采血4.1.1用75%的酒精棉球对欲采血的鸡或者火鸡的一侧翅静脉所在部位的皮肤进行消毒，然后用1 mL注射器（小鸡)或 2.5 mL注射器（中鸡或成年鸡）从翅静脉中抽取 0.5 mL～1.0 mL 血液，置1.5mL微量离心管中，盖上管盖，于环境温度下尽快带回实验室。4.1.2分离血清：待血清析出后（若环境温度过低,可将血液样品置 37℃培养箱 30 min,以便血纤维蛋白收缩从而使血清析出），将盛有血液样品的微量离心管置微量台式离心机中，以3500r/min离心10min，然后用200μL微量移液器把血清转移至0.5mL微量离心管中，置4℃冰箱保存（但不得超过.72 h)。4.2快速血清凝集(RSA)试验4.2.1该试验必须在血清采集后的 72 h 内于室温下进行。4.2.2在干燥灭菌的白瓷反应板上或者载玻片上滴上20μL待检血清，接着滴加20μL的染色抗原， SN/T 1224—2003转动白瓷反应板或者载玻片以使之混合均匀。鸡血清或者火鸡血清在2min 内出现凝集。4.2.3用已知的阳性血清和阴性血清作对照试验，方法与4.2.2相同。4.2.4把在2 min内发生凝集反应的血清置56℃水浴中加热30 min,然后用灭菌的PBS(见附录A)将其稀释成1：2、1：4和1：8,并重新进行试验，方法与4.2.2相同。5 结果判断5. 1阳性结果当血清被稀释成1：4或以上仍发生凝集反应，则判为阳性。5.2可疑结果当血清被稀释成1：2发生凝集反应，但1：4稀释不再发生凝集反应时，则判为可疑。5. 3阴性结果当血清经56℃加热处理后不再发生凝集反应，或者未经56℃热处理的血清也不发生凝集反应，则判为阴性。5.4MG感染阳性禽群当一个禽群中出现高比例的阳性(10%或以上)时，说明该禽群中存在MG感染，特别是在经HI试验（见附录 A)或者ELISA试验证实后更加证明该禽群为 MG感染阳性群。5.5 确证试验为了确