SN_T 3064.3-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第3部分：志贺氏菌.pdf

R中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.3--2011国境口岸蝇类、畵携带重要病原体检测方法第3部分：志贺氏菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port-Part 3 : Shigella2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪。 SN/T 3064.3--2011前 言SN/T3064《国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法》分为11部分：第1部分：通用要求；第2部分：沙门氏菌；第3部分：志贺氏菌；第4部分：致泻性大肠杆菌；-第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌；-第6部分：霍乱弧菌；第7部分:副溶血性弧菌;第8部分：金黄色葡萄球菌;一第9部分：蜡样芽孢杆菌;第10部分：甲型肝炎病毒；-第11部分：寄生虫卵(包囊）。本部分为SN/T3064的第3部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张霞、刘培、关淳、高旗利、张海滨、张海英。 SN/T 3064.3-2011国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法第3部分：志贺氏菌1范围SN/T3064的本部分规定了国境口岸输人性蝇类和璧携带志贺氏菌的检测方法、结果判断、结果报告、阳性结果处置及血清学分型（根据需要）。本部分适用于检验检疫机构对输人性蝇类和蟹携带志贺氏菌的检测和报告。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.5—2003食品卫生微生物学检验　志贺氏菌检验GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3样本检测3.1培养基和试剂需要的培养基和试剂为 GN 增菌液，HE琼脂，SS琼脂，麦康凯琼脂（MAC)，伊红美蓝琼脂(EMB),半固体琼脂，三糖铁琼脂（TSI)，葡萄糖铵培养基，西蒙氏柠檬酸盐培养基，赖氨酸脱羧酶培养基(LD)，鸟氨酸脱羧酶培养基，尿素琼脂和氰化钾(KCN)培养基。具体成分及制备方法见GB/T4789.28。除另有规定外，所用试剂均为分析纯或生化纯，水为蒸馏水。除上述培养基和试剂外还需志贺氏菌诊断血清。3.2检测程序志贺氏菌检测程序参见附录A。3.3操作步骤3.3.1增菌分别取1mL样本处理液加人到100mLGN增菌液中,将GN增菌液放入温箱中,36℃±1℃培养 6 h～8 h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。3.3.2分离具体操作步骤见GB/T4789.5—2003中6.2。3.3.3初步生化筛选具体操作步骤见GB/T4789.5—2003中6.2。1 SN/T 3064.3--20113.3.4血清学鉴定在载玻片上分别加人一滴抗血清和生理盐水，用接种针挑取适量三糖铁斜面上的可疑培养物分别加到抗血清和生理盐水中，前后摇动载玻片 30 s～60 s,在黑色背景下观察。先用四种志贺氏菌多价血清进行检查，不凝集可用鲍氏多价血清检查，若仍不凝集，可用疾志贺氏菌3型～12型多价血清检查。如果由于K抗原的存在而出现不凝集，应将菌液煮沸后再检查。3.3.5生化鉴定抗血清凝集的培养物，应进一步进行生化鉴定，志贺氏菌生化特性见表1。也可用API20E或VITEK进行生化鉴定。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌抗血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。酒表1志贺氏菌属生化特性葡萄糖铵阴性西蒙氏柠檬酸盐阴性赖氨酸脱羧酶阴性鸟氨酸脱羧酶a尿素酶阴性KCN生长阴性注：a为除宋内氏菌和鲍氏13型为陷性其茶为阴性。4结果报告能与某种志贺氏菌抗血清发生凝集生化反应相符则报告该批样中检出志贺氏菌。?5阳性结果处置判断为阳性结果的分离株应电有资质的相关实验室确诉·阳性结果确认后应及时上报主管部门。6血清学分型（根据需要)判定为志贺氏菌的培养物，根据需要进行志贺氏菌血清型分型，志贺氏菌属内四个群的血清型见表2。先用群多价血清分群，再用群因子血清分型，福氏志贺氏菌分型还需要使用型特异血清。具体方法按志贺氏菌诊断血清使用说明书进行。表2’志贺氏菌属内四个群的血清型志贺氏菌属群抗原血清型痫疾志贺氏菌A1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13B福氏志贺氏菌1a,1b,2a,2b,3a,3b,3c,4a,4b,5a,5b,6,X,Y鲍氏志贺氏菌c1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18D宋内氏志贺氏菌12 SN/T 3064.