SN_T 3937-2014出口饮料中磷酸胆碱的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3937—2014出口饮料中磷酸胆碱的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of choline phosphate in drinks for export-LC-MS/MS method2014-11-01实施2014-04-09发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3937---2014言前本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局。本标准主要起草人：潘国卿、郑书展、李刚、白国涛、张春艳、卢华卫、郭铁筝。I SN/T 3937—2014出口饮料中磷酸胆碱的测定液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了饮料中磷酸胆碱的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于果汁饮料、运动饮料、葡萄酒、啤酒和清酒中磷酸胆碱的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样用水稀释提取，经离子交换固相萃取柱净化（酒类饮料使用HLB固相萃取柱预净化），用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2甲酸：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4乙酸铵：分析纯。20 mmol/L乙酸铵溶液:1.54 g乙酸铵溶解于1 000 mL水中。4.510%甲酸甲醇溶液：10.0mL甲酸溶解于甲醇中,用甲醇定容至100mL。4.6氯化磷酸胆碱标准品（CAS:107-73-3,CsH15CINO4P）：纯度99%。4.7磷酸胆碱标准储备溶液：称取0.0120g氯化磷酸胆碱标准品（4.7），用水溶解定容至100.0mL，溶4.8液浓度为 100 μg/mL,1℃～ 4℃冷藏保存,有效期 6个月。4.9磷酸胆碱标准工作溶液：用乙-水溶液（1+1，体积比)稀释储备液，配制成浓度分别为5ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL的标准工作溶液,现用现配。4:10固相萃取柱：HLB固相萃取柱，200mg,使用前用甲醇和水各5mL 淋洗。SAX固相萃取柱，500mg，使用前用甲醇和20mmol/L乙酸铵溶液各5mL淋洗。4.11 0.22 μm水性滤膜。1）非商业性声明本试验是用Waters HLB固相萃取柱完成的，此处列出试验用固相萃取柱型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试使用不同厂家或型号的固相萃取柱。11 SN/T 3937--20145仪器和设备5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量为0.01g和0.0001g。5.3旋涡混合器。5.4固相萃取装置。5.5氮吹浓缩仪。5.6超声波清洗器。5.7均质器。6试样的制备与保存6.1试样的制备6.1.1液体试样将取得的代表性试样混匀后，装人洁净的玻璃器皿中，密封并做好标记。6.1.2含有果肉、果渣等固体的试样将取得的代表性试样用均质器均质后混匀，装人洁净的玻璃器Ⅲ中，密封并做好标记。6.2试样的保存将试样置于 4℃以下冷藏保存。7 测定步骤7.1　提取7.1.1果汁、运动饮料、葡萄酒和啤酒准确称取1g试样（精确至0.001g），加水稀释至10.0mL，混匀，准备过固相萃取柱净化。7.1.2清酒准确称取1g试样（精确至0.001g），加水稀释至100.0mL，用移液管准确吸取 1.00mL样液，加1.00 mL乙酸铵溶液（4.5）,混匀，准备过固相萃取柱净化。7.2　净化7.2.1果汁、运动饮料和清酒用移液管准确吸取提取液1.00mL过SAX固相萃取柱,弃去流出液，用3.0mL甲醇淋洗。然后用8.0mL10%的甲酸甲醇溶液（4.6)洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1.00mL乙腈-水溶液(1+1，体积比)定容。混匀后过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱测定。7.2.2葡萄酒和啤酒用移液管准确吸取提取液 1.00 mL过 HLB固相萃取柱，用 2.0mL 水洗脱,接收全部流出液。将2 SN/T 3937--2014流出液全部转移至SAX固相萃取柱，弃去流出液，用3.0mL甲醇淋洗，然后用8.0mL10%的甲酸甲醇溶液（4.6)洗脱，洗脱液用氮气吹干，用移液管加1.00 mL乙腈-水溶液（1十1，体积比)定容。混匀后过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱测定。7.3测定7.3.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）色谱柱:H