DB37_T 4043-2020生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定　液相色谱-柱后光化学衍生法.pdf

ICS 67. 050X 04DB37山長东省地也方标准DB37/T4043—2020生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-柱后光化学衍生法Detection of aflatoxin B、B2、G、G2Mi、M2 contents inraw milk byliquidchromatography with post-column photochemical derivatization2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 4043—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农科院农业质量标准与检测技术研究所、青岛农业大学、青岛农业大学海都学院。本标准主要起草人：王玉涛、韩荣伟、于忠娜、蔡达、徐宁、张潇、高磊、赵玉华、刘俊华、秦宏伟、邱慧玲、王军、盖学武、焦霞、杨永新。I DB37/T 4043—2020生鲜乳中黄曲霉毒素B、B2、Gi、G2、M、M2的测定液相色谱-柱后光化学衍生法警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光（阳光），具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。1范围本标准规定了测定生鲜乳中黄曲霉毒素BI、B2、GI、G:、M、M含量的液相色谱-柱后光化学衍生测定方法。本标准适用于生鲜乳中黄曲霉毒素B、Bs、Gi、G2、M、M的定量测定。本标准方法的检出限：黄曲霉毒素B为0.002g/kg，黄曲毒毒素B,为0.002μg/kg，黄曲霉毒素G为0.002μg/kg，黄曲毒毒系G,为0.002μg/kg，黄曲霉毒素M,为0.005μg/kg，黄曲霉毒素M,为0.002μg/kg：本标准方法的定量限：黄曲霉毒素B为0.006g/kg，黄曲霉毒素B,为0.005μg/kg，黄曲霉毒素G:为0.005g/kg，黄曲霉毒素G为0.006μg/kg，黄曲霉毒素M:为0.015μg/kg，黄曲霉毒素M为0. 006 μg/kg-2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的黄曲霉毒素Bi、B、Gi、G2、M、M用甲醇溶液提取，提取液经黄曲霉素毒素免疫亲和柱净化、富集，用高效液相色谱分离后经柱后光化学衍生，荧光检测器检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙晴：色谱纯。4.3甲醇水溶液：取50mL甲醇，加入50mL纯水，混合均匀。4.4流动相：乙腈+水=20+80。分别取200mL乙睛，800mlL水，混合均勾，并脱气备用。4.5黄曲霉毒素（Bi、B2、G1、Gz、Mi、M）标准储备溶液：采购市售标准溶液，分别用甲醇配成100ng/ml的标准储备液。储备液于-4℃避光保存（有效期三个月）：4.6免疫亲和柱：柱容量≥100ng(柱容量、回收率、柱回收率验证方法参见商品说明书)注：对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量验证。1 DB37/T 4043—20204.7滤膜：0.45μm有机滤膜。5仪器设备5. 1液相色谱仪：荧光检测器。5. 2光化学衍生装置。5.3分析天平，感量0.01g5.4固相萃取装置。5. 5旋涡混合器。5. 6冷冻离心机：转速不小于10000r/nin。5. 7氮吹仪。测定步骤6. 1提取称取20g样品，精确到0.01g，置于50mL的离心管中，加入10mL甲醇，涡旋5min，以10000r/min的转速在-5条件下于冷冻离心机离心10min，取上清液加水定容至50mL，备用。6.2净化将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，待免疫亲和柱内的液体放弃后，将上述样液移至50mL注时器筒中，控制流速为1mL/min3mL/min。待样液滴完后，往注射器筒内加入10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱后，吹干亲和柱。加入2×2mL乙睛(或甲醇)洗脱亲和柱，控制流速为1mL/min3mL/min，吹干亲和柱，收集全部洗脱液至刻度试管中，在50℃下氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45m有机滤膜过滤，供液相色谱测定。6. 3标准曲线配置用流动相（4.4）将黄曲霉毒素B、B2、Gi、G2、M、M稀释成0.1ng/mL～10.0ng/mL的系列标准溶液.6.4测定6. 4.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件列出如下：a