CJ 150-2001城市供水 致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验.pdf

CJ/T 150—2001前言本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。本标准由国家城市供水水质监测网天津监测站负责起草。本标准起草人：张旭东、李。本标准参加验证单位：北京监测站、上海监测站、深圳监测站、武汉监测站、昆明监测站。58 中华人民共和国城镇建设行业标准城市供水致突变物的测定CJ/T ·150— 2001鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验Urban water supply-Determination of mutagenesis-Salmonella typhimurium /Mammals microsomal enzyme test1 范围本标推规定了用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验测定城市供水的致突变性。本标准适用于城市供水及其源水水质致突变性的测定。本标准规定以 2 L 为接种的最高检测水样体积。2 方法人工诱变鼠伤寒沙门氏菌突变株（即组氨酸营养缺陷型），在无组氨酸的培养基上不能生长，如受到致突变物的作用，使其基因发生变化而回复突变为原来的野生型，即使在缺乏组氨酸的条件下也能生长（如下图所示）。其中一些致突变物为直接致突变物。另外一些为间接致突变物，即需代谢活化后具有致突变性。正向突变回复突变组氨酸营养缺陷型-野生型野生型3 试剂和材料3.1营养肉汤牛肉浸膏5 g蛋白陈10 g氯化钠5g蒸馏水1 000 mL将上述成分混合后，加热溶解，用饱和NaOH溶液调节pH值至 7.2,分装于试管中，每管10mL。经121℃高压湿热灭菌20 min。4℃冰箱保存，供增菌使用。（保存期7天)3.2 V-B液柠檬酸(C.H.O,·H2O)10 g磷酸氢二钾(K,HPO4·3H,O)65. 5 g磷酸氢铵钠(NaNH,HPO4·4H2O)17.5 g硫酸镁(MgSO·7H,0)1.0 g蒸馏水500 mL将上述试剂在少量蒸馏水中溶解后,稀释至 500 mL。硫酸镁水溶液在最后缓慢加人以防止产生沉淀，经滤纸过滤后，于4℃冰箱保存。3.3底层培养基中华人民共和国建设部2001-07-17 批准2001-12-01 实施59 CI/T 150—2001葡萄糖20 gV-B液100 mL琼脂17 g蒸馏水900 mL将 V-B液用饱和 NaOH 溶液调节 pH 值至 7. 0。另将葡萄糖溶于 100 mL 蒸馏水中(溶液变黄者弃去重配），两者于 115℃灭菌 10 min。琼脂于 800 mL蒸馏水中煮沸溶化，121℃灭菌 20 min，待其凉至80℃左右，将前两者倒人混勾。浇制平板，每皿 25mL。于 4℃冰箱中可保存 14天。3. 4 0. 5 m mol /L-组氨酸-0. 5 m mol /L-生物素溶液成分L~组氨酸(FW155.7)7.8 mg［或L-组氨氮酸盐酸盐(FW209.63)10.5 mgJD-生物素12.4 mg蒸馏水100 mL混勾溶解，于4℃冰箱中保存。3. 5 0. 1 mol /L-组氨酸溶液L-组氨酸(FW155.7)1.56 g［或L-组氨酸盐（FW209.63）2.10 g]蒸馏水100 mL混匀溶解，于4℃冰箱中保存。3.6营养琼脂琼脂16 g营养肉汤1 000 mL将琼脂倒人营养肉汤内加热煮沸，用饱和 NaOH 溶液调节 pH 值至 7. 2~~7. 4,121℃高压灭菌20min。于4℃冰箱中可保存14天。3.7 H-顶层培养基琼脂0.6 g氯化钠0.5 g燕馏水100 mL将琼脂和氯化钠溶于蒸馏水中加热煮沸，以每支试管2.5mL分装，加塞，121℃高压灭菌20min。于4℃冰箱中可保存14天。3.8H+项层培养基H-顶层培养基100 mL0.1 mol/LL-组氨酸溶液10 mL将加热溶化了的H-顶层培养基加入0.1 mol/L L-组氨酸溶液 10 mL 混匀，趁热以每支试管2.5 mL分装，加塞，121℃高压灭菌20 min。于 4℃冰箱中可保存 14天。3.9顶层培养基H-顶层培养基100 mL0. 5 mmol /L L-组氨酸-0. 5 mmol /L D-生物素溶液10 mL将加热溶化了的 H-顶层培养基加人 0.5 mol /L L-组氨酸-0.5 mmol /L D-生物素溶液后混匀,趁热以每支试管2.5mL分装，加塞，121℃高压灭菌20min。于 4℃冰箱中可保存14天。3.100.2 mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.4)每 100 mL含0.2 mol/L 磷酸氢二钠(NazHPO,· 12H,O)81 mL60 CJ/T 150—20010.2 mol/L 磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)19 mL若 pH值小于 7.4，用0.2mol/L磷酸氢二钠调节至7.4,115℃高压灭菌10min，于 4℃冰箱