NY_T 4030-2021CN动物土拉杆菌病诊断技术.pdf

ICS 11.220CCS B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T4030—2021动物土拉杆菌病诊断技术Diagnostic techniques for animal tularemia2021-12-15发布2022-06-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 4030—2021目次前言范围规范性引用文件术语和定义临床诊断. 1流行特点4. 2临床症状4. 3病理变化4. 4结果判定革兰氏染色检查5. 1材料准备5. 2操作方法5. 3结果判定细菌分离6. 1材料准备6. 2样品准备6. 3接种培养6. 4生长特性6. 5生化特性6. 6结果判定多重PCR7. 1材料准备7. 2样品前处理7. 3模板DNA制备7. 4操作方法7. 5结果判定实时荧光PCF样品前处模板DNA制备操作方法3. 5结果判定ELISA9. 1器材9. 2试剂9. 3操作方法9. 4结果判定10综合判定附录A资料性）土拉杆菌病诊断方法的适用性附录B(资料性)土拉杆菌病简介 NY/T 4030—2021附录A(资料性）拉杆国病诊断方法的适用性土拉杆菌病各种诊断方法的适用性见表A.1。表 A. 1土拉杆菌病诊断方法的适用性方法土拉杆菌病调运前土拉杆菌病根除运动中临床病例流行率的调查免疫后个体或群体清净排的监测阅性个体的复核的盐测的确诊免疫状态的监测病原鉴定细菌分离-+++n/a抗原检测+++n/a实时荧光PCR++++++n/a免疫反应的检测ELISA++++++++++++n/a注：十十十为推荐的方送；十十为合适的方法：十为在一些情况下可以使用，但费用、可靠性和其偿因素严重限制了其应用；一为不适用于谈目的；/a为不可用，量然并非所有标注十十十或十+类别的试验部经过了正式的验证，但它们的常规待性和它们已经被广泛应用且没有可质疑结累的事实使这费试验被接受 NY/T 4030—2021附录B(资料性）土拉杆菌病简介土拉杆菌病是由土拉杆菌（Franciserlatularensis)起的一种人兽共患病。在自然条件下，该病发生于免（家免和野免）和啮齿类动物，尤其是田鼠、香鼠、松鼠和酶狸鼠等小型啮皆类动物，也有其他多种哺乳动物、岛类、两档动物和无育椎动物感案的报道，吸血节股动物对自然环境中土拉杆菌的生存和疾病传猎起着重要作用。土拉杆菌为革兰氏阴性球杆菌，大小为(0.7~1.0)mX(0.2~0.5)μm，无运动力，不形成芽孢，专性需氧，最适生长温度为37C，根据培养特性、流行病学特征和毒力，可将土拉杆菌分为土拉热型（A型)和全北区型（B型），A型土拉杆菌与北美地区的免类发病有关，主要通过绅、鲤的叮咬或直接接触感染动物传播，对人和家免具有极强的致病性，大部分分离株能发酵甘油。B型土拉杆菌主要发生于水生啮齿动物（海里、腺鼠）、北美的野鼠及欧亚大陆的免类（野免）和响内类动物，主要通过直按接触或节肢动物（主要是贰子和蚊子)传播，也可通过呼吸道或消化道传播，对人和家免的致病性较小，且不发酵甘油。土拉杆菌病以发热、沉部和通常引起败血症为特征。人感染后会在感染部位出现溃疡或熙肿(动物上则很少见），局部淋巴结肿大，死后剖检可见淋巴结有干酪样坏死，脾脏、肝眸、脚脏、心包、肾脏和其他脏器有浅灰白色坏死灶，败血症病例中脾脏明显肿大，土拉杆菌极易感案人，在我国卫生健康委员会制定的人间传染的病原微生物名录中属于第二类细菌，活菌操作和动物试验均需在生物安全三级实验室进行，样品检测需在生物安全二级实验室中进行，运输包装需遵守UN2814中的规定。土拉杆菌病的实验室检测工作应符合GB19489的规定，田间采集病料时要采取特别防护措施90 NY/T 4030—2021(资料性）试剂的配制C.13%盐酸酒精取浓盐酸3mL，加入95%乙醇97mL，混合均匀。C. 2结晶紫染色液取1g结晶紫溶于20mL95%乙醇中，然后与80mL1%的草酸铵水溶液混合，C3革兰氏碘液将1g碘与2名碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL，C.4沙黄复染液将0.25g沙黄溶解于10mL95%乙醇中，然后加人90mL蒸馏水。C. 5弗朗西斯培养基蛋白陈1. 0 g牛肉膏0. 5 g氯化钠0. 5 g琼脂2. 0 g燕水100. 0 mL胱氨酸(或半胱氨酸)0. 1 g葡萄糖1. 0 g免、马或人的脱纤血10. 0 mLpH 7. 2~7. 4先将胱氨酸(或半胱氨酸)用少量蒸馏水溶解，并加人少量NaOH溶液助溶，待胱氨酸(或半胱氨酸）充分落解后，加人以上除新鲜脱纤血以外的其他成分，加热落化，调节pH，121C高压灭菌15mn，冷却到50℃，以无菌操作加人新鲜脱纤血，摇匀，倾注平板，配置好的培养基可于4℃保存至8d～10d。也可用商品化的蛋白脉球脂培养基，接