DB37_T 603-2006鸡肝中呋喃唑酮代谢物(AOZ)残留量的测定 酶联免疫吸附法.pdf

ICS 65. 020. 30B40DB37山 东省地方标准DB37/T603—2006鸡肝中呋喃唑酮代谢物（AOZ）残留量的测定-酶联免疫吸附法Determination of furazolidone(AOZ) in chicken liver enzyme linked immunosorbentassay2005-06-28发布2006-07-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37 /T603—2006前言本标准由山东省备牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出，本标准起草单位：山东省畜产品质量检测中心。本标准主要起草人：高迎春、陈玲、冯修光、魏秀丽 DB37/T603—2006鸡肝中呋喃唑酮代谢物（AOZ）残留量的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了鸡肝中响唑酮代谢物（AOZ）残留量的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于鸡肝中呋响唑酮代谢物（A0Z）的快速检测．本方法检测限为100ng/kg。该方法适合于对试样的筛选，检测结果阳性者，需进一步用其他方法确证。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理联板的微孔板包被有针对唑酮抗体的抗体，加入呋响唑酮抗体，酶标记物，标准或样品溶液，游离呋响唑酮与酶标记物竞争呋响唑酮抗体，同时呋响唑酮抗体也与固定的羊抗体结合，通过洗涤除去没有结合的酶标记物，将酵基质/发色剂加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物，加入反应终止波后由蓝色转变为黄色，用酵标仪在450nm处测定吸收度，标准曲线计算。4材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为蒸水，符合GB/T6682三级水的规定。4. 12—硝基苯甲醛溶液c【（CH,NO,）】=1mo1/L。4. 2二甲基亚钢（(CHs)2S0)4. 3乙酸乙酯（CHC00CH)4. 4正己烷[CH,(CH,),CH,]4. 5磷酸氢二钾溶液c【(K,HPO,))I =0. 1mol/L.4. 6氢氧化钠溶液c【（NaOH）】=1mol/L.4. 7盐酸溶液 c【（HC1）】=1nol/L。4. 8呋响唑酮代谢物（A0Z）系列标准液4. 9酵标记物4. 10呋响唑酮代谢物（AOZ）抗体液4. 11基质/发色剂4. 12反应终止液4. 13样品及洗涤缓冲液5.仪器5.1分析天平：感量0.01g5.2离心机(5000r/min)5.3微量移液器：单道1μL~100uL；多道50μL~250μl5.4均质器5.5振荡器1 DB37 /T603—20065.6酵标板5.7酵标仪6测定步薪使用不同品牌试剂盒时，试样的提取方法和测试程序可根据试剂盒说明书略作调整6.1试料的提取1mol/L的HCL（4.7）和100μL10mmo1/L的2-硝基苯甲醛（4.1）（用二甲基亚溶解），充分振荡：在37C过夜孵育（大约16小时），分别加入5mL0.1mo1/LK,HP04（4.5），0.4mL1mo1/LNa0H（4.6）和5mL的乙酸乙酯（4.3），剧烈振荡30秒钟。在20℃-25℃以3000r/min离心10分钟，取出2.5mL的乙酸乙酯（4.3）上层波到另一个新的容器中蒸干燥，用1mL的正已烧（4.4）溶解干燥物，用1mL的样品移释液适当的混合，在20C-25℃以3000r/min离心10分钟。取50μL的下层液体进行分析。6.2测试程序6.2.1取出酶标板（5.6）及所有试剂，使试剂盒温度升至室温。6.2.2分别吸取系列标准溶液（4.8），空白试料溶液，试样溶液各50μL到各自的微孔中。6. 2. 3加入50μL酵标记物溶液（4.9）到每一个微孔底部，充分混合。6. 2. 4加入50μL抗体溶液（4.10）到每一个微孔底部充分混合，封口膜封板，室温孵育60min。品洗涤缓冲液250L到酵标板（5.6）的微孔内，然后倒出孔内液体，如此重复操作三次。6.2.6加入100μL基质/发色试剂（4.11）到每一微孔中，充分混合并在室温暗处孵育15min。6.2.7用多道移液器每孔加终止液（4.12）100μL。6.2.8将酵标板（5.6）放于酶标仪内，于450nm波长处测定吸光度值。以零标准吸光度值A为100%计算，折算出各标准和试样的相对吸光度值。以此吸光度百分比为织坐标，对应的各标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。待测样品根据其吸光度，查标准曲线得到盐酸克伦特罗的含量（m）。L结果计算试样中呋响唑酮代谢物(A0Z)的含量（X）以μg/kg表示，按公式(1)计算m