NY_T 557-2021CN马鼻疽诊断技术.pdf

ICS 11.220CCS B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 557—2021代替NY/T 557—2002马鼻疽诊断技术Diagnostic techniques for glander布2022-06-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 557—2021目次前言引言范围2规范性引用文件.2术语和定义马鼻宜临床诊断鼻菌素点眼试验6鼻疽补体结合试验鼻疽菌索皮内注射试验病原分离与鉴定马异殖的综合判定附录A（资料性）补体结合试验各成分的配制附录B（资料性）血清样品的采集和处理附录C(资料性)标准比色孔的制备附录D(资料性)培养基的配制 NY/T 557—20217.2.4提纯募疽菌素（用生理盐水稀释至0.5mg/mL)。7. 33检查方法以生理盐水稀释的提纯鼻疽菌素于马颈部皮内注射0.1mL，经72h，用卡尺检查皮肤的增厚度及炎症反应。7.4结果判定7.4.1如局部皮肤类症反应明显，皮肤增厚4mm以上者，判定为阳性反应(十）。7.4.2如局部皮肤炎症反应明显，皮肤增厚2.1mm~3.9mm者判为疑似反应（土）。7.4.3如局部皮肤无炎症反应，皮肤增厚2mm以下者，判定为阴性反应(一)。7.4.4对于疑似反应(7，4.2)的马可在对侧部位，用同一批募值菌索微第二回皮内注射试验，注射后经72h，仍呈疑似反应或呈阳性反应，判定为阳性反应。:病原分离与鉴定8. 1器材准备8.1.1温箱。8. 1. 2显微镜。8. 1. 3无菌棉拭子8. 1. 4载玻片，8. 1.5无菌平皿，8. 1. 6无菌试管和试管架，8. 1.7生物安全柜。8. 1. 8铂金耳(或一次性无菌接种环)。8. 1. 9酒精灯。8. 1. 10甘油肉汤(见附录D中的D.1)。8. 1. 11孔雀绿酸性复红甘油琼脂（见D.2)，8. 1, 12硫董葡萄糖甘油琼脂（见D.3)。8. 1. 13生化用培养基：应符合GB/T4789.28中的规定。8. 1. 14革兰氏染液：应符合GB/T4789.28中的规定，8. 2样品的采集与处理8.2.1患病活动物，用棉拭子采集异腔分泌物、皮肤溃疡物或脓肿穿刺物，直接接种在孔蛋绿酸性复红甘油琼脂或硫董葡萄糖甘油琼脂平板上，或将其置于每毫升含青霉素500U的稀释液试管中待检。8.2.2死亡的动物，可解剖后无菌采集有病变的肝、肺等内脏器官，8.3病原分离8.3.1采集的样品，可以直接接种在孔雀绿酸性复红甘油琼脂或硫基葡萄糖甘油琼脂平板上，37℃培养48h。也可以将样品置于甘油肉汤中37C增菌培养24h后.再接种在孔雀绿酸性复红甘油琼脂或硫革葡萄糖甘油琼脂平板上。萄糖甘油琼脂平板上培养48h后，形成淡黄绿色到灰黄色菌落。8.3.3挑取可疑菌落缴纯培养，然后用平板凝集反应和生化试验进行鉴定。8.4鼻疽伯克霍尔德氏菌的鉴定8.4.1染色镜检鼻疽伯克霍尔德氏菌为革兰氏阴性、无芽孢、无英膜、不运动、单在、成对或成群的中等大小杆菌。但老龄培养菌常呈多形性，有样状、分枝状和长丝状 NY/T 557—20218. 4. 2平板凝集反应用鼻症伯克霍尔德氏菌阳性血清假平板凝集反应，应呈阳性反应，8.4.3生化试验分别接种各类生化反应培养基，具体的生化反应内容见表6。表 6鼻疽伯克霍尔德氏菌的生化性状项目生化特性项目生化特性淀粉水解(+)液化明胶+左旋木糖+靛基质左旅核糖乙酸丙酸-V-P硝酸盐还职+MRL敦氨酸L异亮氨酸鼠化氢产生+乙醇胺注：十：阳性：一：附性（+)：10%~90%菌株阳性，8.4.4鼻疽伯克霍尔德氏菌与类鼻疽伯克霍尔德氏菌鉴别整别要点见表7。表7鼻殖伯克霍尔德氏菌与类鼻疽伯克霍尔德氏菌鉴别要点颗毛及新分离运动性硫化3. 1F淀粉左能左能WZ动力茵落氢产生生长水解本糖核糖丙酸盐L敏氨酯鼻宜伯克霍尔德氏面光清-+不生长(+)+1类界益铂克霍尔德氏菌有常有皱纹+-生长--++++注+性：B性；（+)，10%~90%菌株附性。6马鼻殖的综合判定9. 1按4.5.1为阳性者，判定为马鼻。9. 2按4.5.2为疑似者，或对无症状动物进行检验时，应结合鼻疽菌素点眼试验、补体结合试验、鼻疽菌素皮内注射试验或病原分离鉴定进行判定。判定标准如下：a)按5.5鼻殖菌素点眼试验为阳性者，判定为马募殖b)性者，判定为马鼻疽。若鼻疽菌素点眼试验阴性，需做鼻疽菌素皮内注射试验进行判定，按7.4皮内试验为阳性者，则判定为马鼻殖。c)按8.4临床病例采集样品病原菌分离鉴定阳性者（符合8.4.1~8.4.3)，判定为马鼻疽。 NY/T 557—2021附录A(资料性)补体结合试验各成分的配制A1生理盐水8.5g分析纯NaCI溶于1L蒸馏水中，121C高压灭菌15minA.2稀释液：巴比妥缓冲液(VBS)的制备A.2.1成分5,5