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动物细胞制药1第1页/共55页 第一节 概 述细胞学说的建立组织培养和细胞培养细胞工程学第2页/共55页 第二节动物细胞的形态和生理特点 一、动物细胞的形态 适应功能,形态各异。 离体培养细胞分两类： 贴壁细胞 悬浮细胞第3页/共55页 第4页/共55页 ⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面， 自身分泌或培养基中提供的贴 附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型第5页/共55页 ⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。第6页/共55页 二、动物细胞的生理特点⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M）第7页/共55页 G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成S期：6～8h DNA合成G2期：2～5h DNA量加倍, RNA合成M期：0.5～1h 染色体分裂第8页/共55页 第9页/共55页 第10页/共55页 细胞代数为细胞分裂次数传代数表示细胞培养分种传代次数细胞代数=传代数×分种数/2X=(logN-logNo)÷log2 X 代数 N 培养最终细胞数 No 培养起始细胞数倍增时间=培养经过时间÷代数第11页/共55页 ⒉细胞生长需贴附于基质,并有接 触抑制现象。⒊正常二倍体细胞的生长寿命是 有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系第12页/共55页 ⒋动物细胞对周围环境十分 敏感; 对理化因素敏感，如： 渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。第13页/共55页 ⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。第14页/共55页 　⒍动物细胞蛋白质的合成途 径和修饰 功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位： 游离核糖体 粗面内质网的核糖体 第15页/共55页 游离核糖体合成蛋白质用于 细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋 白质是分泌的和膜中的整合 蛋白多为糖蛋白。第16页/共55页 动物细胞生产药物缺点:培养条件高、成本贵、产量低。优点:分泌胞外、纯化方便、翻译 后修饰糖基化，与天然产品一致。第17页/共55页 第三节生产用动物细胞的要求和获得 一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系第18页/共55页 二、生产用动物细胞的获得⒈原代细胞是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。第19页/共55页 ⒉二倍体细胞系　原代细胞经过传代筛选克隆， 从多种细胞成分的组织中，挑 选并纯化出某种具有一定特征 的细胞株。第20页/共55页 二倍体细胞有正常细胞的特点：①染色体组型是2n核型；②贴壁依赖接触抑制；③可传代培养50代；④无致瘤性。二倍体细胞第21页/共55页 ⒊转化细胞系 通过某个转化过程形成的，常 由于染色体断裂变成异倍体， 失去正常细胞特点，而获得无 限增殖能力。转化过程可以是 自发的，和人工的，从肿瘤组 织中。第22页/共55页 三、常用生产用动物细胞的特性 W1-38：正常胚肺组织人二倍体 细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞， 能产生胶原，培养基用BME （Eagle’ Basal medium）。第23页/共55页 10%小牛血清，pH7.2,同工酶为G6PD B型。倍增时间为24h，有限寿命50代。安全，用于制备疫苗。第24页/共55页 MRC-5：从正常男性肺组织 中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。第25页/共55页 有限寿命42～46代。增殖 速度较W1-38快，对不良 环境敏感性较W1-38低。 对人的病毒敏感。 用于生产疫苗。第26页/共55页 CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分 离的上皮样细胞。 核型： 2n=20～22。 培养基：DEME培养基 0.1mmol/L次黄嘌呤，0.1mmol/L胸苷， 10%小牛血清， 加入脯氨酸。第27页/共55页 BHK-21:从5只无性别的生长1天的地鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞,核型为2n=44;培养基为