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RNA生物合成采用;转录 (transcription) 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 ;转录与复制相同点;转录与复制不同点;第一节 原核生物转录的模板和RNA聚合酶;;模板链：反意义链（antisense strand ）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。;5’-----GCAGTACATGTC-----3’编码链 DNA 3’-----c g t c a t g t a c a g-----5’模板链 5’-----GCAGUACAUGUC-----3’ RNA N ------Ala--Val--His--Val------C 蛋白质;2.不对称转录(asymmetric transcription) ;二、原核生物RNA聚合酶; ( NMP )n + NTP → ( NMP ) n+1 + PPi;全 酶 核 心 酶 ;核心酶 (core enzyme);三、RNA聚合酶结合到DNA的启动子上起动转录;调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位，也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。;RNA聚合酶保护法;;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合:;第19页/共79页;原核生物的转录过程;一、转录起始需要RNA聚合酶全酶;第一个磷酸二酯键生成后，σ亚基即从转录起始复合物上脱落，核心酶连同四磷酸二核苷酸，继续结合于DNA模板上，酶沿DNA链前移，进入延长阶段。 ;RNA-pol的移动;E.coli的转录起始;1、RNA聚合酶（核心酶） 与DNA模板紧密结合，沿3’→5’方向移动 解旋作用：DNA解开17 bp（拓扑异构酶） 聚合功能：NTP不断聚合（形成磷酸二酯键 ） RNA链不断延长。 （不具外切酶功能） 2、杂交螺旋 RNA-DNA形成12bp长的杂交螺旋 转录产物RNA沿5’→3’方向脱落、延长 RNA延长速度：40个核苷酸/秒/每分子酶 DNA双螺旋随后渐渐恢复（拓扑异构酶）;RNA-pol （核心酶）—— DNA ···· RNA;第27页/共79页;;;依赖Rho 因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止;ρ因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ρ因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强。 ρ因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。;ρ因子的作用原理：;第33页/共79页;目前认为，ρ因子终止转录的作用是：与RNA转录产物结合，结合后ρ因子和RNA聚合酶都可发??构象变化，从而使RNA聚合酶停顿，解螺旋酶的活性使DNA/RNA杂化双链拆离，利于产物从转录复合物中释放 。;（二） 非依赖 Rho因子的转录终止;5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` ;茎环结构使转录终止的机理：;第38页/共79页;;第三节 真核生物的转录过程;一、真核生物RNA聚合酶（三种）;二、转录因子（真核生物）;真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化 启动子（promoter）：是DNA上的特殊的序列，其中最重要的保守顺序称TATA (box)盒子，是RNA聚合酶结合部位 转录起始时，RNA-pol不直接结合模板启动子区需要转录因子先与启动子区结合，从而刺激转录。;一个典型的真核生物基因上游序列:;;真核生物RNA聚合酶Ⅱ转录的基因及其转录起始上游序列;第47页/共79页;二 、转录延长;转录延长中的核小体移位;三、转录终止;真核生物的转录终止及加尾修饰;真核生物RNA转录后的加工;几种主要的修饰方式;mRNA的加工;第55页/共79页;（一）首、尾的修饰;帽子结构;5? pppGp…;第59页/共79页;加入polyA;（二）mRNA的剪接;hnRNA是mRNA的前体，大几倍，几十倍;剪接接口： 5’ GU…AG-OH3’;第一次转酯反应;pG-OH (ppG-OH, pppG-OH);鸡卵清蛋白基因;鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图;?修饰包括mRNA分子核糖上2’-羟基的甲基化反应和嘌呤碱的甲基化反应。（胞浆和核内） 编辑（editing）是指在转录后对mRNA序列中的碱基进行变换的过程 ;; rRNA前体的转换 ;真核细胞的5S RNA基因与其他rRNA基因相分开 ，分别有 polⅢ和 polⅠ转录生成。 28S、5.8S与相关的蛋白质一起组成核