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家兔实验弥散血管内凝血第1页/共17页 家兔实验性弥散性血管内凝血Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit第2页/共17页 目的应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性DIC。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断DIC的常用方法，联系理论知识加深理深DIC的病因及发病机理。 第3页/共17页 实验内容称重、固定（清醒状态）、局部浸润麻醉手术：颈动脉插管，采集正常血标本造模：i.v.2％兔脑浸液，60mg/kg（慢,2ml/min，注意兔子挣扎)采集DIC血标本，离心分离血浆备用测定样本：①KPTT,②PT,③Fg,④3P结果汇总第4页/共17页 测定指标和方法白陶土部分凝血活酶时间（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT）玻片法（挑丝法） 凝血酶原时间(prothrombin time, PT)玻片法（挑丝法） 纤维蛋白原（fibrinogen, Fg）含量，饱和盐水法血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P） 第5页/共17页 清洁平皿和试剂37℃预热滴加20ul血浆和20ul KPTT试剂,用清洁针头混匀预热3min滴加20ul 0.025mol/L氯化钙溶液,立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值35～45s）KPTT测定方法第6页/共17页 清洁平皿和试剂37℃预热滴加20ul血浆预热1min滴加40ul PT试剂，立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值11～13s）PT测定方法第7页/共17页 纤维蛋白含量测定方法试管编号1234调零管测定管调零管测定管生理盐水4.5ml4.5ml饱和盐水4.5ml4.5ml正常血浆0.5ml0.5mlDIC血浆0.5ml0.5ml37℃孵浴3min，520nm波长比色，读取OD值第8页/共17页 纤维蛋白含量测定方法各加生理盐水4.5ml 各加饱和盐水4.5ml（调零管） （测定管） 1423正常血浆各0.5ml DIC血浆各0.5ml第9页/共17页 3P试验试管标记1.正常2.DIC正常血浆0.5mlDIC血浆0.5ml1％鱼精蛋白溶液50ul50ul轻轻摇匀，37℃水浴孵浴15min，黑色背景观察沉淀物第10页/共17页 结果组别KPTT(sec.)PT(sec.)Fg(mg%)3P正常DIC正常DIC正常DIC正常DIC12345第11页/共17页 注意事项1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时夹闭动脉造成放血过量和失血。2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝剂之比例(1:9)并充分混匀（颠倒混匀）。3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，并向导管内注入生理盐水（因原来插管内可能已有血栓阻塞）。4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤，要缓慢推注(2ml/min)，密切注意家兔反应，如有明显的呼吸急促和躁动不安，应立即放血。第12页/共17页 注意事项5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出血浆吸入清洁试管备用。6.测KPTT、PT的平皿必须清洁、干燥、无油脂。KPTT试剂使用前须摇匀。7.测Fg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要立即进行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊前亦要再次混匀。8.测3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。第13页/共17页 讨论兔脑浸液引起DIC的原因和机制？KPTT、PT、Fg和3P各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化?KPTT、PT、Fg和3P的测定原理及发生变化的原因和机制?第14页/共17页 DIC动物模型的复制方法凝血酶蛇毒兔脑浸液内毒素羊水第15页/共17页 实验室诊断DIC的方法 筛选指标：血小板计数（platelet，PLT）凝血酶原时间(prothrombin time，PT) 纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg）纤溶指标：FDP测定、3P试验、优球蛋白溶解时间、D-二聚体，等第16页/共17页 谢谢观看！第17页/共17页