NY_T 4039-2021CN 禽偏肺病毒感染诊断技术.docx

ICS 11.220 CCS B 41 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4039—2021 禽偏肺病毒感染诊断技术 Diagnostic techniques for avian metapnumevirus infection 2021-12-15 发布 2022-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 4039—2021 目 次 前言 Ⅱ 引言 Ⅲ 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 缩 略 语 1 5 临床诊断 1 5.1 临床症状 1 5.2 结果判定 2 6 实验室诊断 2 6.1 样品采集 2 6.2 样品运输 2 6.3 样品存放 2 6.4 病毒分离 2 6.5 RT-PCR检测 3 6.6 抗体ELISA检测 5 7 综合判定 5 附录A(资料性)病毒分离用溶液配制 6 附录B(资料性) aMPV感染 Vero CPE 7 附录C(资料性)琼脂糖凝胶配制 8 附录D(资料性)检测 aMPV通用型N基因引物扩增序列(228 bp) 9 Ⅱ NY/T 4039—2021 前 言 本文件按照 GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181) 归口。 本文件起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、北京市农林科学院畜牧兽医研究所、中国动物 卫生与流行病学中心、青岛嘉智生物技术有限公司。 本文件主要起草人：高玉龙、王笑梅、刘爵、刘华雷、秦立廷、刘长军、王楷成、王菁、祁小乐、潘青、韦莉、 蒋文明、王素春、李凯、高立、张艳萍、崔红玉。 Ⅲ NY/T 4039—2021 引 言 禽偏肺病毒(Avian metapneumovrus,aMPV)引起的疾病最早在火鸡上发现，其广泛存在于多种家 禽，火鸡是其主要的宿主，其次是鸡、鸭等。 aMPV 感染火鸡引起火鸡鼻气管炎(Turkey rhinotracheitis, TRT); 感染鸡引起肿头综合征(Swollen head syndrome,SHS),主要引发呼吸道症状和产蛋量下降。根 据 aMPV 吸附蛋白(G 蛋白)基因的不同，将其分为A、B、C和 D4 个亚型。其中，A、B亚型在世界各地均 有广泛报道。欧洲主要流行A、B两种亚型的病毒，以B 亚型为优势流行毒株；而C 亚型 aMPV 主要在美 国、法国和韩国被报道；D 亚型aMPV 仅在法国被报道。感染鸡的主要以 A 型和 B 型 aMPV 为主。目 前，许多国家都有该病报道，我国也有报道。血清学检测结果表明，我国部分养殖场禽偏肺病毒抗体阳性 率高达100%,该病对我国养禽业的危害日益加重。由于该病在我国属于新发传染病，还没有标准化的病 原与抗体检测技术标准，阻碍了由禽偏肺病毒引起的火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合征诊断、流行病学调查和 疫苗免疫效力的评估。基于此，特制定了本文件。 本文件的制定参考了OIE 《陆生动物诊断试验和疫苗手册》第3.3.15章(2018年)内容，并结合本单 位和国内外相关检测技术，制定了病毒分离、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 检测和抗体酶联免疫吸 附实验(ELISA) 检测技术要求和规范，能满足我国禽偏肺病毒感染诊断的需求。 NY/T 4039—2021 禽偏肺病毒感染诊断技术 1 范围 本文件规定了鸡和火鸡感染禽偏肺病毒的临床诊断，以及禽偏肺病毒病毒分离、反转录-聚合酶链式 反应(RT-PCR) 检测、抗体酶联免疫吸附实验(ELISA) 检测技术要求。 本文件适用于禽偏肺病毒感染的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 aMPV: 禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus) CEF: 鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast) CPE: