NY_T 1247-2022 禽网状内皮组织增殖症诊断技术.docx

ICS 11.220 CCS B 41 NY 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 1247—2022 代替 NY/T 1247—2006 禽网状内皮组织增殖症诊断技术 Diagnostic technique for avian reticuloendotheliosis 2022-07-11 发布 2022-10-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 1247—2022 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替NY/T 1247—2006《禽网状内皮增生病诊断技术》,与 NY/T 1247—2006相比，除结构调 整和编辑性修改外，主要技术变化如下： a) 修改了培养病毒用细胞系(见7.2.2); b) 增加了禽网状内皮组织增殖症病毒逆转录-聚合酶链反应检测方法(见第8章) 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本文件起草单位：山东农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、山东益生种畜禽股份有限公司。 本文件主要起草人：崔治中、赵鹏、孙淑红、李阳、郭龙宗。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： ——2006年首次发布为NY/T 1247—2006; 本次为第一次修订。 NY/T 1247—2022 禽网状内皮组织增殖症诊断技术 1 范围 本文件规定了禽网状内皮组织增殖症临床诊断、病毒分离培养与鉴定、间接免疫荧光试验、逆转录-聚 合酶链反应检测方法、间接 ELISA 抗体检测方法的技术要求。 本文件适用于禽网状内皮组织增殖症诊断及鸡活体和病料组织中禽网状内皮组织增殖症病毒 (REV) 的检测 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽网状内皮组织增殖症 avian reticuloendotheliosis 由反转录病毒属的禽网状内皮组织增殖症病毒(REV) 感染多种禽类引起的一群病理综合征。 3.2 间接免疫荧光试验 immunofluorescent assay;IFA 以细胞增殖的病毒为抗原，与特异抗体结合，再与荧光素标记第二抗体(抗抗体)结合，形成抗原-抗 体-抗抗体复合物，洗涤后在荧光显微镜下观察特异性荧光。 3.3 酶联免疫吸附试验 enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA 将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定 性和定量检测方法。 4 设备和材料 4.1冰箱： -20℃,-80℃。 4.2 恒温培养箱：(36±1)℃。 4.3 冷冻台式离心机(≥12000 r/min)。 4.4 恒温水浴锅：(36±1)℃。 4.5 摇床：(36±1)℃。 4.6 CO? 培养箱 4.7正置荧光显微镜。 4.8 SPF 鸡隔离器。 4.9微量移液器及吸头(10pL、100μL和1000pL)。 4.10离心管(Ep 管):1.5 mL、15mL 和50 mL。 4.11 细胞培养瓶(T25)。 2 NY/T 1247—2022 4.12 细胞培养平皿：90 mm 直径。 4.13 96孔细胞培养板。 4.14 无菌吸管：5mL (具0. 1 mL, 刻度)、10 mL (具0. 1 mL 刻度)。 4.15 载玻片、盖玻片。 4.16 纱布、棉球。 4.17 基因扩增仪。 4.18 电泳仪和水平电泳槽。 4.19 凝胶成像仪。 5 培养基和试剂 5.1 磷酸盐缓冲溶液(0.01 mol/L PBS,pH 7.2)。 5.2 DMEM/F-12 液体培养基(pH7.2)。 5.3 青霉素(10000U/mL) 和链霉素(10000μg/mL)、 制霉菌素(5μg/mL)。 5.4 REVELISA 抗体检测试剂盒。 5.5 REV 参考株(SNV 株)。 5.6 REV 阳性血清。 5.7 REV 单克隆抗体。 5.8 FITC 标记的羊或兔抗鸡IgG 抗体。 5.9 FITC 标记的羊抗鼠IgG 抗体。 5.10 胎牛血清或小牛血清。 5.11 蛋白酶K。 5.12 胰蛋白酶(0.