DB21_T 2981-2018日本落叶松SRAP分析技术规程.pdfVIP

ICS 65.020.01 B 60 备案号：60599-2019 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 2981—2018 日本落叶松SRAP 分析技术规程 Technical Regulations for SRAP analysis in Larix kaempferi 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由辽宁省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：辽宁省林业科学研究院。 本标准主要起草人：王骞春、冯健、于世河、卜鹏图、陆爱君、汪成成、张素清、陈罡、杨鹤、高英 旭、颜廷武、崔雪、丁彪、潘福民、郑颖、王嘉、高宇、陈波、李程、赵济川。 本标准的附录A，附录B，附录C 和附录D 为规范性附录。 III DB21/T 2981—2018 日本落叶松种子园遗传多样性的SRAP 分析技术规程 1 范围 本标准规定了以日本落叶松SRAP 分析的定义、术语、分析原理、仪器设备和实验引物、反应程序。 本标准适用于日本落叶松的SRAP分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 13016-2009 标准体系表编制原则和要求 DB21/T 2589-2016东部白松种源相关序列多态性（SRAP）分子鉴定实验方法 3 定义与术语 下列定义与术语适用于本标准。 3.1 相关序列多态性 sequence-related amplified polymorphism; SRAP 利用1对引物设计对开放阅读框 （open reading frames，ORFs ）进行扩增，因个体不同以及物种 的内含子、启动子与间隔序列长度不等而产生多态性。 3.2 引物 primer 一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸 的出发点而起作用的多核苷酸链。 3.3 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction; PCR 在耐热DNA 聚合酶作用下，于体外快速大量特异扩增待定DNA 序列的方法。 3.4 引物扩增多态性 primer amplified polymorphism 1对引物在两个或两个以上不同材料基因组DNA之间扩增，得到数目不同或长度不同的DNA片段。 4 仪器和设备 4.1 PCR 扩增仪。 DB21/T 2981—2018 4.2 琼脂糖凝胶电泳系统。 4.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。 4.4 凝胶成像系统和照相系统。 4.5 超纯水系统。 4.6 低温高速冷冻离心机。 4.7 超微量紫外/可见分光光度计。 4.8 高压灭菌锅。 4.9 液氮罐。 4.10 超低温冰箱。 4.11 高压电泳仪及配套电泳槽。 4.12 移液器。 5 引物 引物相关信息见附录A 。 6 试剂与溶液 6.1 主要常规试剂见附录B。 6.2 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂见附录C 。 6.3 银染试剂见附录D 。 7 实验程序 7.1 实验材料 选用日本落叶松新鲜针叶提取基因组DNA ，选取适量样品，装入冻存管，液氮速冻，置冰箱（-70℃） 中保存备用。 7.2 DNA 的提取 7.2.1 取 0.5 g 洗干净的针叶，用灭菌剪刀剪成小段置 1.5 mL 离心管中(约至 0.1 刻度线) 。加适量 PVP （聚乙烯吡咯烷酮）和VC （抗坏血酸），