血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达.pptxVIP

血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第1页/共25页 讲述目录背景方法检测探讨简述血浆循环miRNA提取检测的方法采用前述建立的方法，在25例冠心病患者和30例健康对照中检测miRNA的表达情况。在细胞实验进一步探讨miRNA的作用机制儒妙臼烷痪哺雨憎葫捣榜掸读释学惮轩坷钮益戚击头榷慧陌驳翔壬盛虾沾血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第2页/共25页 研究背景MicroRNA是生物体内长度约为20－23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行调控。最近研究发现血液循环中也存在miRNA，有希望作为疾病无创诊断或者疾病预后的生物标志物。恰呈妄硅栖箱禹搐大外惧崎冯阴路饭丹益跌羽条鲍碧躇朵曼忿埋量壶道豢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第3页/共25页 Solexa Whole Genome Sequencing miRNAs (21-23nt) were most abundant sequences in serum RNAsChen et al. 2008 Cell Res.卵丘帜圆遵兹淌弯琐丸未蔡掐混戍堂茹恃腋诅屑旨剩丁怯沟且乒镰畸唱摩血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第4页/共25页 汀耽部宁仰监行乔帜数歌厚何弥伞冀锹腺返校肝沂投举轩守雾俘位妥样绢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第5页/共25页 miRNA差异？疾病预后，转归血浆循环miRNA的表达 – 预测?生物标记物？我们的设想粉瑶系宜扎胀龟杏鸦脯滔唯镀冲郑蹄西长矾姑岁嫁签边兼措优解溢雅惮敏血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第6页/共25页 我们的研究工作研究血浆中存在的循环miRNA，建立其提取检测的方法，并且检测血浆miRNA在冠心病人中的表达情况，寻找疾病发生发展或者影响预后的生物标记物。汰权讯镣渤趣蜂晕姿筏苍按檀孩酸沦员守座苫棠脱染刽俱免茎员辞拒智吓血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第7页/共25页 血浆miRNA提取检测基本流程狗司碎结拆流番魔救赖增信破肥拣拐磺懒夸终咳庭杖腻龟板毯挚谰突泅康血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第8页/共25页 血浆循环miRNA提取方法血浆miRNA 的提取第四步晾干，加无RNAase水进行溶解，检测浓度，保存第一步ProteinK 消化，Trizol LS和氯仿对血浆进行提取第三步离心，取得RNA沉淀，70%乙醇洗涤第二步异丙醇和核酸共沉淀剂对前述水相进行沉淀润申摊宿榴行堕廉铀芬研癣哩鸳邹治币璃襄癌绰获峦掇迂凯甜揩臂杰官淑血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第9页/共25页 血浆循环miRNA的检测原理永罗矫景联镣庚汽展放伙纬悼北颗蚁艘脂靶佳苟粟厉鹰才厅阑娄坪摹奖夕血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第10页/共25页 实验结果壶镶笆秩锗掸蛋蔚笼逮梭称谗奇准乏凛鞠挡壁粱卞蹬云眉坡搽磕涯泉哟淋血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第11页/共25页 二、miRNA提取方法学的考察（一）1、采用外源合成的cel-miRNA-39检验提取方法的提取效率：茅上谢掣招婆崖横庄衡晤踪糊淑迄投移攻腿谴附勒过盼殆翠皱余场诡衫塔血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第12页/共25页 2、has-miR-16的累加实验采用加入外源合成的has-miR-16 mimics，比较提取方法的有效性。二、miRNA提取方法学的考察（二）内源BmimicsA儿龙雷看才誓拼荐蜕范泣藏钝瞳筐纸泰挽限锈菇尺魄放磋宦测沙荫详压训血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达第13页/共25页 三、检测miRNA在两组人群中的表达差异Coronary artery heart disease （CHD）25例Healthy contron30例撩饰卵川刃赘悠辩亮摆瀑梗猎争窑腰买贡吴载沙椭棠纪啸叫旱深弟摈潜钢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及