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本发明公开了一种PD‑1基因敲除的CD19CAR‑T细胞的构建方法，所述方法包括：采用Nucleofector细胞核技术，将含有CD19的单链抗体可变区基因片段的PiggyBac载体质粒Piggybac‑CAR‑CD19，转座酶表达质粒PiggybacTransposase，含有能成功靶向PD1基因的sgRNA表达质粒pGL3‑U6‑hPD1sg1，以及pST1374‑NLS‑flag‑Cas9‑ZF质粒共转染入T细胞，得到PD‑1基因敲除的CD19CAR‑T细胞。本发明实验证明：PD‑1敲
(19)国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 CN 112458116 B (45)授权公告日 2023.04.14 (21)申请号 202011338905.1 (51)Int.Cl.
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