大肠细菌的基因芯片鉴定.pptxVIP

大肠细菌的基因芯片鉴定; 基因芯片： 是指将特定的DNA或寡聚核苷酸片段通过物理化学方法固定于玻璃、尼龙甚至塑料片上,使多基因分析可同时进行的一种装置。 基因芯片上可固定不同物种特定基因的探针，将从样品中提取并经PCR扩增和荧光标记的特异基因片段与基因芯片上的探针杂交，利用专门的光学仪器，能够检测到这些杂交信号（带有荧光标记的双链核酸），杂交信号出现在某物种的探针位点上，说明样品来自于该物种。 ;基因芯片上固定探针的方法;基因芯片制作和检测的原理;实验方案;第一部分 细菌培养;第二部分提取纯化大肠杆菌基因组DNA;第二部分 实验步骤;5、加入与菌液等体积（1.6ml）的苯酚/氯仿/异戊醇混合液，用漩涡混合器混匀，4000r/min离心10min。注意吸取混合液前将混合液充分振荡混匀。 6、取上层水相至无菌离心管，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，用移液器反复吹打混匀，4000r/min离心10min。 7、将上层水相转移到另一个无菌离心管中，加入2μl RNase A，37℃水浴中温育30min。 8、加入等体积的氯仿和异戊醇混合液，充分振荡， 抽提残留在水相中的苯酚。4000r/min离心10min。 9、将上清液移至新的离心管中。;10、加入上清液1/10体积的3mol/L NaAc溶液，以及上清液2倍体积的无水乙醇，颠倒混匀以沉淀DNA。室温下静置10min，DNA形成白色（或淡黄色）絮状沉淀。 11、用移液器轻轻吸住白色絮状沉淀，将其转移到装 有适量75%乙醇的1.5ml离心管中。上下颠倒漂洗，洗去杂质。7500r/min离心5min。 12、去上清液，沉淀干燥后溶解于100μl TE中。; 取10μl提取的基因组DNA溶液加1.99ml水稀释后测量OD260，蒸馏水作为空白，计算DNA产量（1 OD260＝50μg DNA/ml）。 -20℃贮存其余基因组DNA，待下一实验用作PCR反应的模板。 ;试 剂;第三部分 PCR扩增;PCR反应程序;第四部分基因芯片杂交和检测;每个阵列的探针排布;;实验步骤;撕去围栏上的保护纸;贴 围 栏;第四部分 实验步骤;往杂交盒底部的凹槽中加水;将贴好围栏的芯片放入杂交盒;盖上盖片;第四部分 实验步骤;加杂交液;盖上盒盖，插上卡子;放入恒温水浴中保温;第四部分 实验步骤;;基因芯片扫描仪;基因芯片扫描仪工作原理;基因芯片扫描仪工作流程;软件界面;大肠杆菌的检测结果;黄单胞菌的检测结果;试 剂;感谢观看！