基因克隆基因剔除.pptxVIP

基因克隆基因剔除;;六、基因剔除技术 （一）基因剔除技术的概念 基因剔除（gene knock out）或基因靶向(gene targeting)灭活是将生物体中某一特定的基因功能给破坏，再研究当生物体缺少这个基因在生长发育的过成中会有怎样的改变，或是会好发怎样的疾病。;原理：利用细胞复制分裂时，染色体进行联合互换发生同源重组homologous recombination） ;ES cell;Prdx1+/+: wide type mice(N=34) Prdx1+/-：Prdx1 heteroxygous mice(N=88) Prdx1-/-：Prdx1 knock out mice(N=64);进入多重防护的SPF动物室;DNA显微注射;动物饲养;（二）基因剔除技术的应用 ;Model Organisms Used in Functional Genomics;Major Events in the Development of Gene Targeting;骨保护蛋白 (Osteoprotegerin, OPG);Procedure of Knockout Mice;七、RNA干扰技术 （一）RNA干扰技术的概念 生物体内，双链RNA(double-stranded RNA， dsRNA)，能识别含有其互补序列的mRNA并与之结合，在酶的作用下降解mRNA，从而干扰相应基因表达。这一现象称为RNA干扰(RNA interference，RNAi)。;（细胞膜）;RNAi现象的发现;; Fire等(1998)发现将dsRNA注入线虫体内后可抑制序列同源基因的表达,并证实这种抑制主要作用于转录之后，所以又称转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing, PTGS)。该课题组将这一现象称为RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）。 ;;;;Initiation Step;Effector Step;;;RNA诱导沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）的组成;Vectors expressing siRNAs;Vectors expressing siRNAs;（二）RNA干扰技术的应用 1．用于功能基因组分析 随着人类基因组计划的完成，科学家急需一种新的、快速的方法解读基因功能、基因表达机制以及基因之间的相互关系。而RNAi技术已成为解决这些问题的重要手段。 ; RNAi可以高通量分析植物的全基因组基因。 在水稻和拟南芥的基因组测序完成后，人们获得了众多的候选基因，RNAi为注释和认识这些基因在植物体中所起的作用提供了一种快速、高效的鉴定方法。;2．用于生物遗传改良 ; RNAi的功能之一是保护基因组不被可移动的基因元件如转座子或病毒RNA的侵犯，RNAi效应为植物中利用siRNA抗病毒提供了广阔的前景。 以靶mRNA为模板的PCR模式尤其适用于抗变异病毒：只需要根据病毒保守的序列设计siRNA，就可抑???所有的变异病毒。;3．用于基因治疗 ; 2003年爆发的非典型肺炎给人类健康带来极大的危害，引起全球关注。 2005年，中美科学家根据RNA干扰的原理研制出了一种可有效抑制SARS的新疗法：利用小型RNA片段阻碍基因的表达，即RNA干扰(RNAi)。;冠状病毒基本结构;乙肝病毒的结构;RNAi用于肿瘤的治疗;赵伟红，郭俊明，等.生存素siRNA表达质粒对MGC-803细胞细胞周期和增殖的影响. 世界华人消化杂志，2005，13：2302-2305; （三）RNAi的优点 ①简单易行，容易开展;感谢观看！