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本发明公开了提供一种检测多个单核苷酸多态性的方法、试剂盒及其应用,属于基因检测技术领域,该方法主要包括:根据靶标基因序列,设计上游引物、下游引物和两条邻近单标记探针,配制多重PCR反应体系,采用引物对称扩增方式进行扩增,然后进行熔解曲线分析。本发明利用两条邻近单标记探针与靶标结合/解离状态下的荧光信号差异,增强区分SNP等位基因的能力,使多重PCR的判读更加清晰。本发明通过引物对称扩增+快速降温的方式获得单链扩增产物,能有效降低多重引物体系间的扩增效率差异,解决高GC模板扩增问题。本发明方法突破
(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 114480594 A (43)申请公布日 2022.05.13 (21)申请号 202111591011.8 C12N 15/11 (2006.01) (22)申请日 2021.12.
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