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人教人教选修动物细胞工程第1页/共51页第2页/共51页多莉克隆猴第3页/共51页动物细胞工程的常用技术有哪些？1）动物细胞培养技术2）动物细胞融合技术3）单克隆抗体技术4）胚胎移植技术（如试管婴儿）5）核移植技术（如克隆动物）以上技术的基础是什么?第4页/共51页一、动物细胞培养 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有什么特别的地方？为什么选用动物胚胎或幼龄动物个体的器官或组织做动物细胞培养的材料？为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？为什么选用胰蛋白酶做上述处理？培养的细胞为何贴壁生长？如何界定原代培养和传代培养？动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成为生物个体？第5页/共51页动物细胞培养过程第6页/共51页动物组织（常取胚胎或幼体组织）[胰蛋白酶等]分散的单个细胞细胞悬液培养瓶培养“10代危机”，大多数死亡可继续传代的细胞基本过程要从原代培养到传代培养原代培养的细胞第7页/共51页细胞贴壁过程第8页/共51页两种贴壁的培养细胞第9页/共51页遗传性尚稳定[胰蛋白酶等]细胞悬液培养瓶培养“50代危机”绝大多数死亡可无限传代的细胞遗传性改变，具癌变特点传代培养的细胞第10页/共51页接触抑制定义：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。第11页/共51页动物细胞培养过程胰蛋白酶胶原蛋白酶胰蛋白酶胶原蛋白酶动物组织细胞悬液（原代 传代 培养 培养）分散成单个细胞培养原理：细胞增殖（有丝分裂）结果：细胞群，细胞产物第12页/共51页培养条件无菌、无毒消毒、灭菌抗生素定期更换培养液，清除代谢废物营养合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素（血清、血浆）温度和pH36.5±0.5℃，7.2---7.4气体95%空气，5%CO2?第13页/共51页动物细胞培养技术的应用（1）用于制造有重要价值的蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（3）用于检测有毒物质（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据第14页/共51页植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的分散处理脱分化细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基蔗糖 植物激素葡萄糖 动物血清植物体细胞群快速繁殖、培育无病毒植株细胞或细胞产物无有无有第15页/共51页问题讨论 1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？２、1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？第16页/共51页 动物体细胞核移植技术和克隆1、什么是克隆?就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。2、以前学习过动物克隆的实例吗？多莉羊3、请简述多莉克隆的过程？第17页/共51页二、动物体细胞核移植技术和克隆动物概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。分类胚胎细胞核移植、体细胞核移植第18页/共51页 采用此方法可以将两个不同种、属的动物优点集中在一起，产生具有双亲优点的可繁殖的杂种动物。 此外，细胞核移植对动物优良杂交种的无性繁殖具有重大意义。这一技术的成功与完善对于优良家禽的无性繁殖和濒临绝迹的珍贵动物的传种意义重大 第19页/共51页细胞核移植电脉冲刺激胚胎移植妊娠、出生黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核克隆羊多莉重组细胞早期胚胎另一头绵羊的子宫克隆羊多利第20页/共51页第21页/共51页克隆步骤上第22页/共51页克隆步骤下第23页/共51页阅读与思考以概念图的形式表示体细胞核移植过程？取供体细胞取卵母细胞培养到 MⅡ中期 供体细胞培养 卵母细胞去核 供体细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎 代孕母牛 生出与供体遗传物质基本相同的个体第24页/共51页请归纳动物体细胞核移植概念: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 胚胎细胞核移植核移植体细胞核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞第25页/共51页思考题1、在进行体细