基因操作课件.pptVIP

;本章节重点;重组DNA技术(recombination DNA technique)：将目的DNA片段或人工合成的基因，通过运载体在体外重组、转移并插入到另一种生物的基因组中，使其表达为新的性状或用于进一步的研究。也称基因工程(genetic engineering)，是基因操作的核心技术。包括DNA克隆(DNA cloning)和分子杂交(molecular hybridization)。;构建;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;限制性内切核酸酶;限制性内切核酸酶;进行DNA重组，需要载体DNA和外源DNA具有相同序列的粘性末端。;重组DNA技术流程简图;DNA连接酶;ligase;运载体;插入型 置换型;质粒是存在于许多细菌中，独立于染色体外的双链闭合环状DNA分子。;质粒(plasmid);λ噬菌体是一种可在体外包装的细胞病毒，能高效感染细菌细胞并在其中克隆中等长度的DNA片段的载体。;粘粒是将质粒和λ噬菌体改建的一种人工载体。;可环化，不会裂解宿主细胞 (λphage ) 可自我复制 (plasmid) 45 kb外源DNA 可与同源序列质粒重组;粘粒(cosmid);P1噬菌体 PAC;运载体;;细胞克隆(Cell clone);重组DNA克隆的分离;重组DNA克隆的分离;重组DNA克隆的分离;基因文库;胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES cell);同源双链(homoduplex);探针(probe)：分子杂交检测其互补序列的标记DNA或RNA序列，能在许多DNA或RNA序列的复杂混合物中识别所需克隆的分子。;简并探针(degenerate probe);单一EST探针(unique EST-base probe);32P，35S，3H;缺口平移法(nick translation);缺口平移法;缺口平移法;缺口平移法;缺口平移法;;pApCpGpTpTpApCpGpGpApCpTpGpTpTpApCpCpGpApT;缺口平移法(nick translation);随机引物延伸法;随机引物延伸法;缺口平移法(nick translation);分子杂交;ASO杂交;;Southern印迹(Southern blot) ;Southern Blot;镰状细胞贫血(HbS)： 第5～7位密码子;Northern印迹(Northern blot) ;;Western Blot;Polymerase Chain Reaction, PCR;Mullis F;Template DNA;Polymerase Chain Reaction, PCR;Denaturing step: 94~95℃;Polymerase Chain Reaction, PCR;Polymerase Chain Reaction, PCR;Polymerase Chain Reaction, PCR;Polymerase Chain Reaction, PCR;本章节重点 ;本章节重点;重组DNA技术(recombination DNA technique)：将目的DNA片段或人工合成的基因，通过运载体在体外重组、转移并插入到另一种生物的基因组中，使其表达为新的性状或用于进一步的研究。也称基因工程(genetic engineering)，是基因操作的核心技术。包括DNA克隆(DNA cloning)和分子杂交(molecular hybridization)。;构建;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;重组DNA技术流程简图;限制性内切核酸酶;限制性内切核酸酶;进行DNA重组，需要载体DNA和外源DNA具有相同序列的粘性末端。;重组DNA技术流程简图;DNA连接酶;ligase;运载体;插入型 置换型;质粒是存在于许多细菌中，独立于染色体外的双链闭合环状DNA分子。;质粒(plasmid);λ噬菌体是一种可在体外包装的细胞病毒，能高效感染细菌细胞并在其中克隆中等长度的DNA片段的载体。;粘粒是将质粒和λ噬菌体改建的一种人工载体。;可环化，不会裂解宿主细胞 (λphage ) 可自我复制 (plasmid) 45 kb外源DNA 可与同源序列质粒重组;粘粒(cosmid);P1噬菌体 PAC;运载体;;细胞克隆(Cell clone);重组DNA克隆的分离;重组DNA克隆的分离;重组DNA克隆的分离;基因文库;胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES cell);同源双链(homoduplex);探针(probe)：分子杂交检测其互补序列的标记DNA或RNA序列，能在许多DNA或RNA序列的复杂混