体外抗菌实验.pptx

第1页/共55页体外抗菌实验第2页/共55页? 第十九章 药物的体外抗菌试验第3页/共55页 药物的体外抗菌试验 antimicrobial test in vitro 药物的体外抗菌试验是在体外测定微生物对药物敏感程度的试验， 已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长.杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不能再生长繁殖。第4页/共55页第一节 常用的体外抑菌试验连续稀释法色serial dilution test 可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培养基。?1．液体培养基连续稀释法 (见下图)2．固体培养基连续稀释法 分平板法和斜面 法。第5页/共55页第6页/共55页琼脂扩散法agar diffusion test 是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作用强弱。 inhibition zones?1、滤纸片法 适用于新药的初筛试验。2．打孔法 适于药物血浓度的监测。3．挖沟法 适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验菌的抗菌作用。第7页/共55页第二节 杀菌试验用以评价药物对微生物的致死活性。最低杀菌浓度： 指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生物广义而言，也可称之为最低致死浓度(MLC)。? 是将待检药物先以合适的液体培养基在试管内进行连续稀释，每管内再加入一定量的试验菌液，培养后可得该药物的MIC，取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别移种于另一无菌平板上，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度即为该药物的MBC(或MLC)。第8页/共55页活菌计数法 是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌，作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生物数计算出药物对微生物的致死率。石炭酸系数（又称酚系数） 是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下，作用一定时间，将待测的化学消毒剂与石炭酸对伤寒沙门菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较， 所得杀菌效力的比值。?第9页/共55页棋盘格法 是由于在试验时，含两种不同浓度药物的试管排列呈棋盘状而得名， 用以评价两种药物同时用不同浓度进行联合试验时的抗菌活性。?第10页/共55页第三节 联合抗菌试验? 在药学上作中，常需检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累加(addition)。第11页/共55页纸条试验 即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或无影响来判断它们在联合应用时的效应。?梯度平板纸条试验 需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条两边的抑菌区被扩大。第12页/共55页第四节 体外抗菌试验的影响因素1．试验菌 在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标准菌株。2．培养基 培养基的质量须加控制。3．抗菌药物 药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的结果，需要精确配制。?第13页/共55页 第二十章药物制剂的微生物学检查?第14页/共55页药物制剂的微生物学检查? 药物制剂的微生物学检查主要包括:规定灭菌药品----------无菌检验非规定灭菌药品-------微生物限度检查第15页/共55页第一节 无菌检查一、无菌检查的概念及应用范围（一）概念 p333（二）无菌检查的基本原则采用严格的无菌操作方法，将被检查的药品取一定量分别接种于适合各种微生物生长的不同培养基中（通常为需氧菌培养基、厌氧菌培养基和真菌培养基），置适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断被检药品是否合格。由于无菌检查是用部分样本的结果推断整体的含菌情况，故被检药品的取样及程序必须按照国家药典的规定进行。 第16页/共55页(三）应用范围1 各种注射制剂2 眼用及外伤用制剂3植入剂4 可吸收的止血剂5 外科用敷料及器材第17页/共55页第二节 无菌制剂的无菌检查（一）一般药品的无菌检查 一般药品的无菌检查法属于直接接种法，即将检品按规定量直接分别接种于适宜需氧菌、厌氧菌和真菌生长繁殖的一定量的培养基中，同时以同样的培养基作阳性对照试验