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第十一章动物细胞培养与表达制备药用蛋白 名词解释： 动物细胞培养: 是模拟动物体内的生理环境使细胞在体外分裂增殖的一种技术 。 原代培养: 是指将机体取出的细胞或组织进行培养，在首次传代前的培养 传代培养: 是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。 天然培养基:直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液。 中空纤维: 是一种细微的管状结构，表面在许多海绵状的多孔结构,类似动物的毛细血管，内腔灌流培养 液，外面接种细胞。 细胞株: 是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由细胞增殖形成的 细胞群，称细胞株。 问答题 1试述动物细胞培养的特点。 答：①动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。 ②动物细胞倍增时间长，生长缓慢。 ③培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感。 ④动物细胞间主要以聚集体形式存在。 ⑤原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡。 ⑥动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，一般还需要血清。 ⑦对于培养环境极其敏感，包括pH、溶解氧、温度、剪切力等。 ⑧细菌、真菌、病毒、支原体均可导致动物细胞培养物的污染。 ⑨绝大多数哺乳动物细胞只有贴附在固体或半固体的表面才能生长。 2贴壁培养的动物细胞按形态可分为几种类型？ 答：大致分为四种类型： 成纤维型细胞：与体内成纤维细胞形状相似，细胞大致呈梭形或不规则形，细胞贴壁后呈长梭形，胞质 外伸出2-3个长短不同的突起。起源于中胚层的细胞在体外培养时一般表现为这种形式。 上皮型细胞：类似上皮细胞的细胞，扁平状，较为规则，呈三角形及不规则扁平的多角形。起源于内胚 层与外胚层的细胞在体外培养时都可能呈现上皮型。 游走型细胞：细胞质常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，贴附于支持物上分散生长，一般不 连接成片。单核细胞、巨噬细胞及某些肿瘤细胞在体外培养常呈现此种形态。 多形型细胞：形态上不规则,一般分胞体和胞突两部分，最常见的是指神经元和神经胶质细胞。 3试述动物培养基的种类和各自和特点。 答：天然培养基：有血清、血浆、组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）和水解乳蛋白。 合成培养基：根据细胞生存所需的物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的，主要成分是氨基酸、维 生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质，有利于标准化生产，组分和含量相对固定，成本低。 但缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要，因此需要补充一定量的天然培养基。 无血清培养基：由基础培养基和添加成分 （细胞外基质、生长因子、结合蛋白与转运蛋白、酶抑制剂 等）组成，保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性。减少了细胞污染，简化了提纯和鉴定各种细 胞产物的程序，但是无血清培养液中能促进细胞系生长的补加物都是独特的。不同细胞株，所需补加物 也不同。 4培养动物细胞所用灭菌方法有些？各适用于哪些用品“ 答：物理灭菌法： 紫外线消毒：用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养 板等。一般要照射30min以上，这是常使用的消毒方法之一 湿热灭菌： 此方法也称为高压蒸汽灭菌，是适用面广、最有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、 橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks 液、PBS等)。灭菌条件是121℃、30min 过滤除菌 ：包括两方面 一是用超净台对操作空间的空气除菌；二是用滤膜对培养用液和各种不能高压 灭 菌的溶液（如抗生素、激素、酶液、血清的灭菌。以0 ．22 μm滤膜除菌最为常用。 火焰灭菌：用于玻璃吸管、培养瓶口的灭菌。 化学消毒法： 70％(或75％)酒精 (卫生级) ：最常用的化学表面消毒剂 ，用于手和一些金属器械或工作台面或物体表面 的消毒。 0 ．5％过氧乙酸：是强效消毒剂，10 min即可将芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒，用喷撒和擦拭 方式进行。 5试述动物细胞原代培养的方法。 答：（一）组织块原代培养 1、处死动物，取材分离 3 2、组织剪碎（1mm ) 3、冲洗、离心 4、接种、培养 5、常规检查(细胞形态活力、营养、pH及污染) (二)细胞原代培养 1、取材分离，组织剪碎 2、消化液(常用胰酶)消化 3、过滤离心分离、计数 4、接种、培养 5、常规检查 6试述动物细胞传代培养的方法 答：悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l ／2一2 ／3 ，然后用吸管直接吹打形成细