浙江大学细胞工程.pptxVIP

会计学第1页/共66页 目录3.1植物组织培养的方法3.2植物的试管繁殖 3.3植物细胞突变体的筛选及应用3.4植物细胞的大量培养及次生代谢产物的生产第2页/共66页3.1植物组织培养的特点3.11植物组织培养发展简史3.12植物组织培养实验条件与培养基3.13植物组织培养的一般方法3.14植物细胞的全能性和分化调控植物组织培养第3页/共66页无菌条件下，利用人工培养基对植物体的器官、组织和细胞进行培养。3.11植物组织的发展简史第4页/共66页①探索阶段（本世纪初~30年代中） 德国植物生理学家HaHerlandt首次进行了细胞培养实验②奠基阶段（30~50年代） 1934年，White培养番茄离体根尖成功。 1939年，Gautheret连续培养胡萝卜根形成层首次成功。 White:烟草种间杂种的瘤组织，进行组培。 Nobecourt：胡萝卜进行组培， 三人是植物组织的奠基人。③迅速发展阶段（60年代后）原生质体，花药，微繁技术迅速发展。3.12植物组培的实验条件和培养基第5页/共66页准备室：清洗区，干燥箱，工作台， 水箱，天平，灭菌锅等。无菌操作室：超净工作台，可调节光 源，可调节温度培养室：保温隔热，光线合适培养操作器材：试管、 三角瓶、 玻 璃瓶、金属器材第6页/共66页一些设备第7页/共66页培养室培养基第8页/共66页定义：含有一定营养成分，供组织培养植物生长的基质。无机营养成分：C，H，O大量元素及部分微量元素。有机营养成分 ①含N物质：包括维生素和氨基酸 ②碳源：2%—5%的葡萄糖 ③琼脂：起支持作用。 ④生长激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素PH值：5.0~6.0间一般，在每次进行植物培养前可利用母液自行配制所需培养基第9页/共66页常用培养基配方第10页/共66页一般方法洗涤第11页/共66页培养瓶和其它器皿应先在清水中浸泡后，然后刷去瓶内污物，再用洗衣粉、洗洁净等洗涤。洗净的器皿应不挂水珠，内外壁水膜均一，置于烘箱内烘干。灭菌第12页/共66页无菌操作是植物组织培养中最关键的技术！培养基应用高压灭菌锅灭菌121度15分钟灭菌一些不耐热的物质将采用过滤灭菌，如生物添加剂、赤霉酸和玉米素等玻璃器皿及耐热用具用干热灭菌。植物材料先刷洗然后冲洗，再用消毒液，如次氯酸钠、升汞等进行表面灭菌，最后用蒸馏水清洗。原代培养第13页/共66页外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官。1）外植体灭菌消毒。（根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉等）2）用消毒过的器械将外植体置于培养皿上。3）切取所需的外植体。4）将外植体接种于培养容器的培养基上，整个试验在超净工作台上进行，保持无菌！外植体经过一段时间在培养基上生长后，会形成愈伤组织。切取第14页/共66页接种第15页/共66页愈伤组织的形成第16页/共66页脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程即形成愈伤组织叫脱分化。愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。再分化：愈伤组织内的细胞具有异质性，能重新分化成各种类型的组织细胞。继代培养第17页/共66页将愈伤组织重新转移到成分相同的新鲜培养基上的过程称为继代，愈伤组织将在不同的培养基上分化形成小芽或根，进而形成小苗。试管苗的炼苗第18页/共66页当小苗生根成为完整的再生植株后，可以出瓶种植。由于环境有很大的改变，首先要进行炼苗，使之适应外界环境。1）开盖，保持小苗的水分供需平衡2）放置在与种植环境相一致的的光、温条件下；或降低温度，增加光照。3）防止菌类滋生。移栽第19页/共66页经过锻炼的小苗，可以和一般植物一样进行大规模栽培第20页/共66页意义1.无性系快速繁殖2.去除病毒、真菌和细菌等病毒3.培育新品种的得力手段4.种质资源的保存5.次生代谢物的生产细胞的全能性第21页/共66页全能性：任何有完整的细胞核的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的遗传信息，理论上都能发育成为一棵植株。植物组织培养是建立在细胞具有全能性的理论基础上的，除受精卵能发育成胚外，植物的体细胞，雌配子、雄配子体都能发育成胚。细胞分化第22页/共66页在体内维管组织是高度分化的部分，主要受生长素和蔗糖的影响，木质部的分化与细胞分裂素、赤霉素和细胞分裂相关。在体外的培养细胞通过茎芽的分化或细胞胚胎发生能再生长成为完整的植株影响茎芽分化的因素第23页/共66页化学因素：促芽形成 细胞分裂素：BAP、6—BA等促根形成 生长素：IAA 、IBA、NHA、2，4—D等物理因素： 光照、温度、材料本身状态等都会影响茎芽的分化。第24页/共66页3.2植物的试管繁殖工艺流程3.21单倍体诱导形成及其应用3.22原生质体的分离和培养3.23体细胞胚胎发生3.24植物脱毒技术培养3.25植物人工种子的制作单倍体培养第25页/共66页单倍