dna提取纯化学习.pptxVIP

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2022-08-08 发布于上海
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dna提取纯化学习.pptx

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学习内容：;1.制备总DNA;1.1培养、搜集细菌细胞;1.1培养、收集细菌细胞; Harvesting bacteria by centrifugation;1.2 制备细胞提取物;Preparation of a cell extract.; 1.3 DNA的纯化 ;Removal of protein contaminants by phenol extraction.; DNA的浓缩最常用的浓缩方法是乙醇沉淀（同时含有Na离子的条件下）。DNA沉淀可用玻璃棒挑出，或者离心沉淀（杂质）。 ;1.4 DNA的浓缩与浓度、纯度的测定;核酸具有结合染料的能力; DNA浓度的测定琼脂糖凝胶电泳检测;琼脂糖凝胶电泳的制备和检查;琼脂糖凝胶电泳的制备和检查;;琼脂糖凝胶电泳的制备和检查 P102;电泳检测;1.4 DNA的浓缩与浓度、纯度的测定;The use of an anion-exchange chromatography resin in DNA purification.;;CTAB法提取植物DNA;2 质粒DNA提取;2质粒DNA提取;第25页/共51页;2.1 根据分子大小提取质粒DNA;2.2 根据分子构造提取碱裂解法在非常窄的pH范围内，非超螺旋化的DNA会变性，而超螺旋化的质粒DNA不变性。在裂解液中加入氢氧化钠，调pH值至12.0~12.5，破坏氢键，使非超螺旋化的DNA变性。加入酸，变性的细菌DNA进一步聚集形成沉淀，通过离心的方法去除。同时利用SDS裂解，KAc中和可以去掉大部分的蛋白质和RNA。上清液中只剩下超螺旋化的质粒DNA了。 ;Plasmid purification by the alkaline denaturation method.;;取液体培养液1.5-3ml于Eppendorf管中，10000r/min离心1min，去掉上清液，加入100?l溶液Ⅰ ，充分混匀; 加入200?l新配制的溶液Ⅱ ，加盖颠倒6-7次使之混匀，冰上放置5min; 加入150 ? l溶液Ⅲ ，加盖后颠倒6-7次混匀，冰上放置5min。 ;I 型：超螺旋环状 II 型：带切口环;Circular forms of DNA migrate in agarose distinctly differently from linear DNAs of the same mass. Typically uncut plasmids will appear to migrate more rapidly than the same plasmid when linearized. Additionally, most preparations of uncut plasmid contain at least two topologically-different forms of DNA, corresponding to supercoiled forms and nicked circles. The image to the right shows an ethidium-stained gel with uncut plasmid in the left lane and the same plasmid linearized at a single site in the right lane. ;2.2 根据分子构造提取;CsCl density gradient centrifugation.;Partial unwinding of the DNA double helix by EtBr intercalation between adjacent base parirs.;2.2 EB—CsCl密度梯度离心法;Purification of plasmiod DNA by EtBr-CsCl density gradient centrifugation;2质粒DNA提取;Plasmid amplification;3 噬菌体DNA的制备;3 噬菌体DNA的制备;3.1 噬菌体的培养; Induction of a λ cl lysogen by transferring from 30 ℃ to 42℃;Achieving the right balance between culture age and inoculum size when preparing a sample of a non-lysogenic phage;3 噬菌体DNA的制备;;3 噬菌体DNA的制备;;3.4 纯化M13 DNA ;Preparation of