登革病毒快速检测技术介绍与应用课件-恒温扩增基因检测技术.pptVIP

恒温扩增基因检测装置在登革热病毒现场快速诊断中的应用 狄 飚 广州市疾病预防控制中心 2015.12.29 内 容 背景 技术组成部分 技术创新 理论创新 应用创新 结构创新 恒温扩增基因检测装置介绍 前期研究 背景（科学研究背景） 全球化的快速发展促使传染病加速扩散； 人口流动、生态环境改变等因素，使动物源病毒不断地扩大宿主范围和流行范围（SARS、人禽流感、埃博拉等）； 2014年全省共有20个地级市累计报告登革热病例42000例,广州地区38000多例 2015年广州仍有100多例 基层卫生部门能否及早开展疫情检测工作，一定程度上决定了传染病的防控效率。 背景（国内外研究/技术发展现状和趋势） 荧光定量PCR技术：仪器昂贵、实验条件要求高； 胶体金免疫层析技术：操作简单、价格低廉，但是灵敏度和特异性较低； 恒温扩增基因检测技术：无需仪器、可现场操作、灵敏度和特异性接近荧光定量PCR； 美国几种恒温扩增技术已商业化：TMA技术、SDA和LAMP；但不适用于现场检测，国内到目前为止尚未有此项技术在疫情现场检测应用的报道。 广州CDC-杭州优思达生物技术有限公司 CPA恒温扩增技术平台 登革病毒核酸检测 利用研发的微量核酸提取装置 全新的核酸恒温扩增技术 核酸免疫试纸条快速检测技术 防污染核酸快速检测技术 装配成新的检测试剂盒，实现登革病毒核酸现场快速检测。 技术组成部分 技术创新 创新点一：微量核酸现场提取装置：（无需任何仪器提取核酸） 创新点二：全新的核酸恒温扩增技术（无需PCR仪、无需专业操作人员、一个小时完成） 创新点三：防污染核酸试纸条快速检测装置：（解决了实验室扩增物污染） 理论创新 一种微量核酸提取装置：实现了无需任何仪器即可简单、快速的提取病原体样本核酸。该装置利用滤膜可以特异吸附核酸的特点，在临床样本进行裂解后，利用装置对临床样本进行过滤、清洗及洗脱，一次性提取DNA和RNA。 理论创新 一种全新的核酸恒温扩增技术：交叉引物扩增靶核酸序列法，在同一温度下、无需PCR仪、无需专业操作人员、1个小时即可完成核酸的全部扩增和杂交过程。 理论创新 核酸免疫薄膜层析技术：利用目前国际上已经十分成熟的蛋白免疫薄膜层析技术，发展出的一种全新的核酸扩增检测技术，即核酸薄膜层析（试纸条）快速检测技术。 结构创新 防污染核酸试纸条快速检测装置采用全封闭式，把基因扩增管、检测试纸条和稀液结合放入一个塑料盒中，只需合上盖子就可以完成检测，并保证反应空间的密封。可以随意组合各种检测项目放入一检测箱中，便于携带至各种场合进行检测，并能现场出结果 恒温扩增基因检测装置 利用恒温扩增基因检测技术和试纸条快速检测装置，装配成试剂盒，实现登革病毒核酸现场快速检测。 整个检测时间约1个小时左右，可避免使用昂贵仪器（水浴锅即可），避免实验室扩增物污染，不需要专门实验室和不需要高级技术人员等条件，完全适用于临床、现场等环境使用。 封闭式核酸快速检测装置抗实验室扩增物污染技术：封闭式核酸快速检测装置解决了实验室扩增物污染的问题。 装置操作步骤 弥补现有登革病毒检测方法 推广到区县级卫生检疫部门和医院 现场检测需求 应用前景 前期研究 2013-2015年恒温扩增实验:对登革病毒、禽流感H7N9、新型H1N1、肠道病毒诺如、轮状、星状、肠道、手足口COX A4、A6、A10、A16、EV71等病毒的进行了实验研究。 项目和专利申请。 微量核酸提取装置提取登革RNA 两种核酸提取方法对试验的结果判断差别不大 恒温CPA检测禽流感H7N9病毒 对37份荧光PCR核酸阳性的临床和环境标本进行了CPA方法的同步实验 结果显示荧光PCR CT值在小于32以内的22份阳性标本中， CPA方法有15份阳性（阳性检出率为68.18%）。实验研究还在调整测试中。 恒温CPA检测手足口COX A4、A6、A10病毒 对COX A4、 A6、 A10病毒荧光PCR核酸阳性的临床标本进行了CPA方法的同步实验 结果显示荧光PCR CT值在小于32以内的阳性标本， CPA方法有均为阳性 恒温CPA、荧光RT-PCR和酶联免疫方法对252份临床标本病原的检测结果 诺如病毒（阳性） 轮状病毒（阳性） 肠道腺病毒（阳性） 星状病毒（阳性） 恒温CPA 80 52 15 26 荧光RT-PCR 76 53 14 26 酶联免疫 54 37 11 18 分别检测了252份临床标本，其中80份为诺如病毒阳性，52份为轮状病毒A组阳性，26份为星状病毒阳性以及15份为肠道腺病毒阳性。与real-time RT-PCR相比，该方法的特异性