菌落计数分析和总结.pdfVIP

食品微生物学检验 菌落总数测定 一、培养基和试剂 1、平板计数琼脂（ plate count agar ，PCA）培养基 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.0 ±0.2 制法 ：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH。分装试管或锥形瓶， 121 ℃高压灭 菌 15 min 。 2、磷酸盐缓冲液 成分 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 34.0 g 蒸馏水 500 mL pH 7.2 制法 ：贮存液：称取 34.0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL蒸馏水中，用大约 175 mL的 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中， 121 ℃ 高压灭菌 15 min 。 3、无菌生理盐水 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL 制法 ：称取 8.5 ｇ氯化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中， 121 ℃高压灭菌 15 min 。 二、操作步骤 样品的稀释 1、固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌 均质杯内， 8000 r/min ～10000 r/min 均质 1 min ～2 min ，或放入盛有 225 mL 稀释液的无 菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min ～2 min ，制成 1:10 的样品匀液。 2、液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的 无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 3、用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面） ，振摇试管或换用 1 支无菌 吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 4、按 3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次， 换用 1 次 1 mL 无 菌吸管或吸头。 5、根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～ 3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可 包括原液） ，在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两 个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6、及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃± 1 ℃ 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 培养 1、待琼脂凝固后，将平板翻转， 36 ℃± 1 ℃培养 48 h ±2 h 。水产品 30 ℃± 1 ℃培 养 72 h ±3 h 。 2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面 覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL ），凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。 菌落计数 可用肉眼观察， 必要时用放大镜