K103微生物学与操作技术K103微生物学与操作技术w5301-4.pdfVIP

农产品与食品质量检测技术教学资源 一、微生物生长量测定 • 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； • 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果； • 客观地反映微生物生长的规律； 单位时间里微生物数量或生物量（Biomass ）的变化 二、测定生长量法 u 直接法测定生长量：测体积法、称干重法 u 间接法测定生长量：比浊法、生理指标法 1、直接法，是测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法，分为： 1）测体积法：粗放型，在刻度离心管中测沉降量。刻度离心管中离心，测定沉淀多少来 确定微生物的生长情况。 2 ）称干重法：在精确型，离心法和过滤法获得菌体细胞，微生物的干重一般为其湿重的 10％～20 ％。将细胞培养液离心或过滤后，洗涤除去培养基成分后转移到适当的容器，置 100~105℃干燥箱烘干或低温低压干燥（60~80℃）至恒重后，称重。 1 农产品与食品质量检测技术教学资源 2、间接测定生长量方法 1）比浊法 用分光光度法对无色的微生物悬浮液进行测定，一般选用 450～650nm 波段。 2 ）生理指标法 一种特定的微生物，每一个细胞中的 ATP 浓度几乎是一个常数，所以测定这种微生物的 ATP 含量，即可知其细胞数。 三、计繁殖数法 • 计繁殖数直接法 • 计繁殖数间接法 • 计繁殖数法 其中最重要的是计数板计数法： 1. 计数板直接计数法 指采用计数板（细菌计数板或血球计数板），在光学显微镜下直接观察微生物细胞并进行 计数的方法。（计算一定容积里样品中微生物的数量） 1） 计数板直接计数方法——采用血球计数板测定细胞个数 2 农产品与食品质量检测技术教学资源 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察。 2）染色后活菌计数法 采用特定的染色技术进行活菌染色，然后用光学显微镜计数的方法。可分别对活菌和死 菌进行计数。例：美蓝 → 酵母→ 活细胞→无色 死细胞→蓝色 这是一种活菌计数法，这是一种依据活菌在液体培养基中会使其变混或在固体培养基 上（内）形成菌落的原理而设计。最常用的是菌落计数法（colony-counting methods ）。 3 ）比例计数法 4 ）过滤计数法 2、计繁殖数间接法 真核微生物的细胞构造是一种活菌计数法，这是一种依据活菌在液体培养基中会使其变 混或在固体培养基上（内）形成菌落的原理而设计。最常用的是菌落计数法（colony-counting methods ）。 1、平板菌落计数法 可用浇注平板（pour plate ）或涂布平板（spread plate ）等方法进行。此法适用于各种好 氧菌或厌氧菌。 采用培养平板计数法要求操作熟练、准确，否则难以得到正确的结果。 3 农产品与食品质量检测技术教学资源 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成单位（colony forming units ， CFU ）来表示，而不是直接表示为细胞数。 2. 膜过滤培养菌落计数法 当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器，然 后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形成的菌落进行统计。 4