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醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白 目的和要求 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法 原理 带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为 电泳 ，其移动方向及速度取 决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度以及溶液 pH 等因素。蛋白质分子在 溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的 可解离基团 如-COOH、-NH 2 、-OH 等， 因而在某种 pH 值溶液中蛋白质分子带有一定的电荷。混合蛋白样品中由于各蛋 白质的等电点 不同，在同一 pH 溶液中所带的电荷性质及电荷数目不同，因此在 电场中各种蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以分离。 血清中含有白蛋白、 α- 球蛋白、 β-球蛋白和 γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立 体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。由下表可见，血清中 5 种蛋白质的等电点大多低于 pH7.0 ，在 pH8.6 的缓冲液中都电离成负离子 (羧基解 离 )，故在电场中均向阳极移动。 蛋白质种类 等电点 (pI) 相对分子量 ( Mr ) 清/ 白蛋白 4.88 69 000 α1-球蛋白 5.06 200 000 α2-球蛋白 5.06 300 000 β-球蛋白 5.12 90 000~150 000 γ-球蛋白 6.85~7.50 156 000~300 000 在一定范围内， 蛋白质的含量与结合的染料量成正比， 故可将各蛋白质区带 剪下，分别用 0.4 mol/L NaOH 溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直 接用光密度计扫描， 以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。 本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。 醋酸纤维素 是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂 (如丙酮、氯 仿、乙酸乙酯等 )后于 聚乙烯 材料上涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后即可。该膜 具有均一的泡沫状结构，有强渗透性、其厚度约为 120 μm。 醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附 现象等优点，目前已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球 蛋白和同工酶的分离及测定。 操作步骤 ㈠ 准备 醋酸纤维薄膜的润湿和选择： 将薄膜裁成 8×2cm 状，使其漂在缓冲液液面 上 (若迅速湿润，整条薄膜一致而无白点，则表明薄膜质地均匀，可用于电泳实 验 )，然后用竹夹 /镊子轻轻地将薄膜完全浸入缓冲液中，待薄膜完全浸透后使用 (约 0.5h)。 制作电桥：将电泳缓冲液倒入电泳槽两边并用虹吸管平衡两边液面。 根据电 泳槽的纵向尺寸， 剪裁尺寸合适的滤纸条。 取四层附着在电泳槽的支架上， 使其 一端与支架的前沿对齐， 另一端则浸入电极槽的缓冲液内。 然后用缓冲液将滤纸 全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为 “滤纸桥 ”。按照同样的方法， 在另一个电极