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ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 36-2020 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫酶组织化学 法检测方法 Immunohistochemistry assayfor detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2020-12-22 发布 2020-12-22 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 36-2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国兽医协会提出并归口。 本文件起草单位：中国动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：李晓霞、王睿男、王传彬、亢文华、徐琦、宋晓晖、顾小雪、毕一鸣、刘颖昳、 张硕、周智、原霖、杨林。 1 T/CVMA 36-2020 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫酶组织化学法检测方法 1 范围 本文件规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的免疫酶组织化学检测方法的材料、操作步骤、结果判 定和注意事项等内容。 本文件适用于猪肺脏、扁桃体、淋巴结、脾脏等组织中猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的免疫酶组织 化学检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 仪器与耗材 切片机、恒温培养箱、显微镜、微量移液器及配套吸头、保湿盒、可调移液器（2 µL 、20 µL、200 µL、1 000 µL）、稀释槽、免疫组化用载玻片、盖玻片、1.5 mL 离心管、免疫组化用染色缸。 5 试剂 5.1 10 %~20 %中性福尔马林固定液，10 mL~20 mL 的中性福尔马林溶液加水至100 mL 5.2 无水乙醇 5.3 二甲苯 5.4 1% 盐酸酒精，1 mL 盐酸溶液加75 %的酒精至100 mL 5.5 3 % H O 溶液 2 2 5.6 pH7.2 PBS 溶液，参见附录A.1 5.7 pH7.3 PBS 溶液，参见附录A.2 5.8 0.25 %胰酶 5.9 5 %健康马血清，5 mL 健康马血清加pH7.3 PBS 至100 mL 5.10 PRRSV 单抗，使用前用已知PRRSV 阳性的组织片测定工作浓度 5.11 PRRSV 阴性组织片、PRRSV 阳性组织片 5.12 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗 2 T/CVMA 36-2020 5.13 苏木素染色液 5.14 水溶性封片剂（GVA ） 5.15 AEC 显色剂 5.16 DAB 显色剂 6 操作步骤 6.1 样品采集和运输