食品生物化学 酶的作用机理 酶第2节酶的作用机理（5酶分离纯化45）.pptxVIP

??酶;PART.05;;沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶的溶解度降低,而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程。常用的有盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法等。;离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程。在离心分离时，要根据待分离物质以及杂质的颗粒大小、密度和特性的不同选择适当的离心机、离心方法和离心条件。;过滤是借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程。过滤介质多种多样，常用的有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等，可以根据需要选用。;过滤又可分为膜过滤和非膜过滤。膜过滤采用各种高分子膜为过滤介质。非膜过滤采用高分子膜以外的物质作为过滤介质。;膜的孔径有多种规格可供使用时选择。如图所示，是四种常用膜分离技术的基本特征。在酶的纯化过程中主要用到的膜分离技术多为超滤。;层析分离是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的（称为固定相），另一个相则流过此固定相（称为流动相）并使各组分以不同速度移动，从而达到分离。;电泳分离带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。电泳方法按其使用的支持体的不同，可以分为：纸电泳、薄层电泳、薄膜电泳、凝胶电泳、自由电泳、等电聚焦电泳等。;萃取分离萃取分离是利用物质在两相中的溶解度不同而使其分离的技术。萃取分离中的两相一般为互不相溶的两个液相。有时也可采用其它流体。按照两相的组成不同，萃取可以分为：有机溶剂萃取双水相萃取超临界萃取反胶束萃取等。;酶纯化的目标是使酶制剂具有最大的催化活性和最高纯度，检验这些指标的方法主要有电泳法、活性染色法、等电聚集法、超速离心法、抗原-抗体免疫法等。;检测纯化酶的催化活性时，要使测定条???下在最适状态。如测定体系中有足够的激活剂和辅因子，无抑制剂等，还需搞清酶在什么条件下保存较为稳定。;在有些情况下需要加入一些还原剂，如二硫苏糖醇、羟基乙醇，以保证半胱氨酸侧链巯基处于还原态。在低温贮存酶时，可将酶在50%的甘油保存，以减少酶失活。;本节课到此结束，谢谢大家