重组蛋白ppt课件.pptxVIP

;1.生物合成：生物体内的蛋白质主要由体内的蛋白质生物合成体系合成，包括以DNA为模板的转录（或以RNA为模板的逆转录）、以mRNA为模板的翻译过程。; 1.蛋白质的人工合成主要指运用化学方法，直接在体外合成携带有合成某种蛋白质的基因，并通过某种受体得到表达。 2.重组蛋白是主要的人工合成方式。;1. 定义：应用重组DNA或RNA技术，获得具有一定功能和活性的蛋白质。 2. 获得途径:可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。当前主要应用的重组蛋白的表达载体包括原核细胞如大肠杆菌、真核细胞如酵母、昆虫细胞以及CHO细胞等。; 重组蛋白可利用转基因动物的乳腺产生，产生的重组蛋白作为生物制药在医学中作用显著。利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。 方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。目前，科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和α-抗胰蛋白酶等重要的医药产品。;按功能分，可分为以下几种：　　1.白细胞介素（Interleukin，IL）　　　　2.干扰素（interferon，IFN）　　　　3.肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）　　　　4.集落刺激因子（colony stimulating factor，CSF）　　 5.生长因子（growth factor，GF）　　　　6.趋化性细胞因子（chemokine）　　; 目前应用最广泛的表达系统有三大类： 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 CHO细胞表达系统 不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达是否形成包涵体，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜??周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统 ;? 捕获阶段 目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。 ? ?? 中度纯化阶段 目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。 ? ?? 精制阶段 目标是除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。 ;蛋白质的性质;　　 （1）目的基因的获取 　　目前，获取目的基因的方法主要有三种：反向转录法、从细胞基因组直接分离法和人工合成法。 　　反向转录法是利用mRNA反转录获得目的基因的方法。从细胞基因组中直接分离目的基因常用鸟枪法，因为这种方法犹如用散弹打鸟,所以又称散弹枪法。用鸟枪法分离目的基因，具有简单、方便和经济等优点。许多病毒和原核生物、一些真核生物的基因，都用这种方法获得了成功的分离。 化学合成目的基因是20世纪70年代以来发展起来的一项新技术。应用化学合成法，可在短时间内合成目的基因。科学家们已相继合成了人的生长激素释放抑制素、胰岛素、干扰素等蛋白质的编码基因。 （2）DNA分子的体外重组 　　体外重组是把载体与目的基因进行连接。例如，以质粒作为载体时，首先要选择出合适的限制性内切酶，对目的基因和载体进行切割，再以DNA连接酶使切口两端的脱氧核苷酸连接，于是目的基因被镶嵌进质粒DNA，重组形成了一个新的环状DNA分子（杂种DNA分子）。;（3）DNA重组体的导入 把目的基因装在载体上后，就需要把它引入到受体细胞中。导入的方式有多种，主要包括转化、转导、显微注射、微粒轰击和电击穿孔等方式。转化和转导主要适用于细菌一类的原核生物细胞和酵母这样的低等真核生物细胞，其他方式主要应用于高等动植物的细胞。 （4）受体细胞的筛选 由于DNA重组体的转化成功率不是太高，因而，需要在众多的细胞中把成功转入DNA重组体的细胞挑选出来。应事先找到特定的标志，证明导入是否成功。 （5）基因表达 目的基因在成功导入受体细胞后，它所携带的遗传信息必须要通过合成新的蛋白质才能表现出来，从而改变受体细胞的遗传性状。目的基因在受体细胞中要表达，需要满足一些条件。例如，目的基因是利用受体细胞的核糖体来合成蛋白质，因此目的基因上必须含有能启动受体细胞核糖体工作的功能片段。 ;Thank you !