临床微生物检验_实验二.pptVIP

- + MR和VP加试剂后观察 + 无色 红色 VP试验 甲基红试验 + - 紫红色 橘黄色 加试剂后观察 乳（+） 葡（产酸产气）H2S(-) 大肠埃希菌在KIA中结果 乳（-）葡（+）H2S(+) 伤寒沙门菌在KIA中结果 乳（－）葡（＋）H2S(-) 志贺菌在KIA中生长结果 KA-+ KA-+ KA-- AA+- 原理：若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶， 能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸，苯丙酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色 加入苯丙氨酸脱氨酶试剂:10%FeCl3 阳性:培养基与试剂接触处出现绿色 阴性:不变色 培养基：苯丙氨酸培养基 A B + - 1、苯丙氨酸脱氨酶试验 原理：细菌具有的尿素酶分解尿素产生氨(氨在溶液中形成碳酸铵)，培养基pH↑ 培养基：尿素培养基 指示剂：酚红 结果： 培养基呈碱性 指示剂显红色+ － ＋ A B 2、尿素酶试验 原理：不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下能分解称为氧化型，无氧条件下能分解称为发酵型,两种情况下均不分解的为产碱型。 结果判定:仅在没有覆盖石蜡油的一管分解糖产酸或产酸产气者属氧化型；两管均分解糖产酸或产酸产气者为发酵型；两管都不生长者为产碱型。 指示剂：溴麝香草酚蓝或溴甲酚紫 培养基：Hugh-Leifson培养基 3、氧化－发酵试验（OF） 氧化－发酵试验（OF） 发酵型 A B C 氧化型 产碱型 4、氨基酸脱羧酶试验 脱羧酶分解氨基酸使脱羧生成胺、CO2，培养基变碱性。 -coo 赖氨酸 尸胺 -coo 鸟氨酸 腐胺 培养基：赖、鸟氨基酸脱羧酶及氨基酸对照培养基 结果： 对照管黄色 测定管紫色+ 接种细菌后，在培养基中加入石蜡油！ 原理：细菌如果能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中的对氨基苯磺酸生成对偶氮苯磺酸，对偶氮苯磺酸再与试剂中的α-萘胺反应，生成可见的红色N-α-萘胺偶氮苯磺酸。 硝酸盐还原的过程可因细菌的不同而异， ①有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；②有的细菌使硝酸盐还原为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解成为氮，此时加入硝酸盐还原试剂不显色，但可以在培养基的小倒管中出现气泡，如假单胞菌等。硝酸盐或亚硝酸盐如果被还原成气体的终未产物如氮或氧化氮，就称为脱硝化或脱氮化作用。 5、硝酸盐还原试验 甲液：甲基α-萘胺 乙液：对氨基苯磺酸 培养后加试剂：甲液、乙液各一滴 阳性:红色 阴性:无色 在无色的培养基中再加入锌粉，判定结果 硝酸盐还原试验 硝酸盐还原试验 A B A B -/+ + 加锌粉 + - 加试剂后  DNA酶 原理： 长链DNA 寡核苷酸链 （可被酸沉淀） （可溶于酸） 方法：点种 - + 6、DNA酶试验 实验内容：各种培养基接种细菌 苯丙： 大肠埃希菌、变形杆菌 尿素： 大肠埃希菌、变形杆菌 赖氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌 鸟氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌 对照管：分别接种伤寒沙门菌或奇异变形杆菌 DNA酶： 金葡菌、大肠埃希菌或铜绿假单胞菌 硝还： 大肠埃希菌或变形杆菌、铜绿假单胞菌 O/F： 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌 每种生化反应每个同学均做并分别接种两种细菌！！ * * 临床微生物学检验 实验 第二周 广州医科大学 实验内容 第一天：生物化学鉴定 葡萄糖、乳糖、VP、MR、硫化氢、 Indol、枸椽酸盐、双糖铁 第二天：生物化学鉴定 苯丙氨酸脱氨酶、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、DNA酶、硝酸盐还原、氧化发酵（O/F） 第三天：生物化学鉴定 氧化酶、触酶、DNA酶试验结果观察 目的要求 1. 掌握鉴别细菌常用生化反应的原理、结果判定及接种方法。 2. 熟悉鉴别细菌常用的复合生化培养基(KIA)的原理、结果判定和应用 第一天实验内容 试剂（微量生化管）： 葡萄糖、乳糖、VP、MR、硫化氢、In