常用饲用酶制剂检测方法介绍（精品课件）.pptVIP

E. 植酸酶 3.丙酮—磷钼酸铵法 原理：磷酸盐与过量的钼酸铵在酸性条件下混合后，可慢慢生成黄色磷钼酸铵，加入丙酮后使黄色物质提出来，在355nm波长处测吸光度，灵敏度增加10倍。 特点：钒—钼酸铵法灵敏度最高，丙酮法稳定性最好，抗干扰能力较强。 E. 植酸酶 4. VC—钼蓝法 原理：该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放无机磷的原理，通过加入三氯乙酸使反应停止，然后加人钼酸铵与VC的混合液，使溶液显色，在820nm波长下测定吸光度，再以标准磷溶液的吸光度及磷溶液浓度对应的酶活单位建立直线回归方程，最后以待测样品吸光度代人方程，计算出酶活性。 影响酶活力的主要因素 A.底物种类和浓度 B.酶活力单位定义 C.酶反应pH值 D.酶反应温度 E.酶反应时间 A.底物种类和浓度 同种方法采用不同底物测定，结果相差很大。 例如木聚糖酶的检测，燕麦木聚糖与桦木木聚糖的测定结果就有明显差距。 底物浓度对酶反应速度的影响图 B. 酶活力单位定义 国际酶学会标准单位：在特定条件下，1分钟内能转化1umol底物的酶量，称一个国际单位（IU）。 酶活计算公式： 酶活性 (U/g) = A × D × 1000 0.2×10×150.13 ×W 其中: A – 比色测定的木糖量，mg/ml； D – 稀释倍数； 1000 –当量换算因数，mmol- umol ； W – 酶样品重量，g； 150.13 – 木糖的分子量，mg/mmol； 10 – 反应时间，分钟。 B. 酶活力单位定义 木聚糖酶的活性定义A：在测定条件下，1秒钟从燕麦木聚糖中产生1nmol木糖所需的酶量。 酶活计算公式： 酶活（IU）= A × D × 1,000,000 0.2 × 600× 150.13 × W 其中: A – 比色测定的木糖量，mg/ml； D – 稀释倍数； 1,000,000 –当量换算因数，mmol- nmol； W – 酶样品重量，g； 150.13 - 木糖的分子量，mg/mmol。 600 – 反应时间，秒。 饲料酶制剂 现市场上常见的饲料酶制剂多为复合酶，其成分木聚糖酶、α-淀粉酶、（酸性或中性）蛋白酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶中的几种。 如何准确检测其中的一种酶制剂的活性？ 酶制剂检测原理 酶与一般催化剂最主要的区别之一是它具有高度的专一性。 酶制剂检测原理 样品检测： 酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降解，然后测定产物含量（分光光度计）。 标准曲线： 通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计算酶活。 酶制剂检测原理 A. а-淀粉酶 1.碘淀粉显色法 利用淀粉遇碘变蓝的反应，检测出未被淀粉酶分解的淀粉，运用分光光度计测定碘反应蓝值的变化，然后查表读取酶活。 特点：测定а-淀粉酶的碘淀粉显色法是专一性较高、操作较简便、准确性也较高的方法。 A. а-淀粉酶 2. DNS显色法 原理：淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，将3，5–二硝基水杨酸试剂还原生成3–氨基–5–硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。 特点：专一性不高，易受其他淀粉酶（主要是β-淀粉酶）的干扰，因此，碘淀粉显色法应用较多。 B. 蛋白酶 1. Folin法 原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨基酸，在碱性条件下，酚基氨基酸与Folin试剂反应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值，计算酶活力。 该法的准确性及灵敏度都较高，在国内已得到公认，是应用最广的方法，我国的部颁标准及各大酶制剂生产企业都采用该法。 B. 蛋白酶 2. 紫外分光光度法 原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨基酸，利用酪氨酸在280nm处有特征性吸收峰,测定计算酶活。 特点：紫外线操作比Folin法简便，但灵敏度仅为Folin法的1/10。 C. 产还原糖酶制剂