基因工程(第二章答案).pdfVIP

第二章 基因工程工具酶 一、解释下列名词 1.Restriction and modification （限制与修饰） 宿主特异性地降解外源遗传物质 （DNA ） 的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。 2. Matched ends(or cohesive end) （匹配末端或粘性末端）识别位点为回文对称结构的 序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端 3. Blunt ends 平末端。在回文对称轴上同时切割 DNA 的两条链，产生的没有碱基突出 的末端称为平末端。 4. Star activity 星星活性。 在极端非标准条件下， 限制酶能切割与识别序列相似的序列， 这个改变的特殊性称星星活性。 5. Klenow fragment Klenow 片段。 Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白 酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5--3 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3--5 外切活性不受影响。 6.Reverse transcriptase 反转录酶。即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有 5--3 合 成 DNA 活性，但是无 3--5 外切活性。 7.Terminal transferase （末端转移酶） 8.Ligase 连接酶。 催化 DNA 5 磷酸基与 3 羟基之间形成磷酸二酯键， 将两段核酸连接 起来的酶。 T4 多聚核苷酸激酶 9.T4 polynucleotide kinase （ ）催化 ATP 的 γ-磷酸基转移至 DNA 或 RNA 的 5 末端。 碱性磷酸酶 10.Alkaline phosphatase （ ）催化除去 DNA 或 RNA 5 磷酸 11.S1 nuclease Sl 核酸酶。可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5 磷酸的单核苷酸或寡 核苷酸双链；对 dsDNA ，dsRNA ， DNA:RNA 杂交体不敏感。 二、填空题 1. 限制性内切核酸酶（ Restriction endonuclease ）的命名是按属名和种名相结合的原 则的，通常第一个大写字母取自（ 属名的第一个字母 ），第二、三个字母取自（ 种名的前 两个字母 ），第四个字母则用（ 菌株名 ）表示。 2 . Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（ 内部 ）或（ 附近 ）切割 DNA，产生带 3 －OH和 5 －P 基团的 DNA的产物，需（ Mg2 ＋）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM。 3. 识别相同序列的限制酶称（ 同裂酶 ） 4.DNA 载体经 HindⅢ切割后产生粘性末端， 能发生载体自连， 影响载体与外源 DNA的连接 效率，常用的防止载体自连的方法有（ 去磷酸化 ）、（ 部分补平 ）。 5. 完全的回文序列应具备两个特点即 （能够在中间划一个对称轴， 两侧的序列两两对称互 补配对 ）和 （两条互补链的 5--3 的序列组成相同， 即将一条链旋转 180°，则两条链重叠 ）。 6. 限制性内切核酸酶（ Restriction endonuclease ）通常保存在（ 50% ）浓度的甘油溶液 中。 7. 载 体 和 外 源 DNA 经 酶 切 ， 在 进 行 下 一 步 操 作 前 ， 需 消 除 限 制 性 内 切 核 酸 酶 （Restriction endonuclease ）的影响。常用的方法有（ EDTA 法 ）、（加热法 ）、（苯酚 抽提法 ）、（ 试剂盒