肝癌细胞上清对细粒棘球蚴原头节体外培养活性的影响.pdfVIP

摘要 目的： 比较三种肝癌细胞上清对体外培养细粒棘球蚴原头节的活性影响。 方法； 收集培养48h 后的Huh7 、Hepa1-6和HepG-2 等3种肝癌细胞无血清上清，分别与细粒棘球蚴 原头节 （每组约5000 个）共培养，对照组只采用无血清培养基培养。培养后第 1、3、5、7d，取 各组混悬液50 μl进行台盼蓝染色观察、计数并计算存活率；培养后第7d，于扫描电镜下观察头节 微观形态，并用ELISA 测定4 组细粒棘球蚴半胱氨酸蛋白酶-3 酶的活性。 结果； 台盼蓝染色可见无血清组、Huh7 组 、Hepa1-6 组和HepG-2 组原头节在第5d 时存活率下降显 著，分别为：46.54% ± 1.11%、46.19%±3.60%、55.90% ± 2.33%和68.73% ± 1.06%；第7d， Hepa1-6组以及HepG2组头节存活率分别为36.09% ± 0.95%和45.69% ± 0.40%，与对照组17.99% ± 1.52%差异均有统计学意义 （P 0.01），Huh7 组 19.04%与对照组 17.99% ± 1.52%差异没有统 计学意义 （P 0.05）。第7d 扫描电镜下可见对照组、Huh7 组原头节形态大体破坏，微毛、吸盘等 超微结构紊乱、崩解，Hepa1-6 组、HepG2 组虫体表面较为饱满且平滑，超微结构也较为清晰完整。 半胱氨酸蛋白酶-3 酶的活性检测结果示Hepa1-6 组和HepG2 组酶活力单位在第7d 分别为20.51 ± 0.61和17.51 ± 0.59，与对照组22.15 ± 1.14相比均有统计学差异（P Hepa1-6 ＜ 0.05，P HepG2 0.01）， Huh7 组22.67 ± 0.96相较对照组22.15 ± 1.14 在酶活性上不存在统计学差异 （P ＞ 0.05）。 结论； 肝癌细胞上清可改善体外培养下细粒棘球蚴原头节活性，并以HepG2 细胞上清作用更明显。 关键词： 肿瘤细胞上清； 细粒棘球蚴； 体外培养； 活性 论文类型：A （基础研究） I Abstract Objective： Tocomparethe effectsofthethreehepatocellular carcinoma cells supernatantson the activity oftheprotoscolecesofEchinococcusgranulosusin vitro. Methods：Serum-free supernatantsofthreetumor cells,Huh7,Hepa1-6,andHepG-2,werecollected after tumor cells cultivated 48 h,then co-cultured with the protoscoleces of Echinococcus granulosus (about 5,000 in each group).The control group was cultured in serum-free medium,only.On the 1st, 3rd, 5th, and 7th days after culture,50 μl ofthe suspension wastaken for trypan blue staining in each group to observing, counting, and calculating the survival rate.On the 7th day after culture,the microscopicmorphology ofthe protoscoleceswree observed under a scanning electron microscope.And ELISAwasused to determine the activity ofCaspase-3in four groupsofEchinococcusgranulosus. Results： Trypan blue staining showedthat the survival rate oftheprotoscoleces ofthe serum-free group